BSP法甲基化分析

DNA甲基化存在于大多數(shù)真核生物中，一般發(fā)生在CpG雙核苷酸中胞嘧啶的5’UTR區(qū)，起調(diào)控作用。

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實(shí)驗(yàn)原理

DNA甲基化存在于大多數(shù)真核生物中，一般發(fā)生在CpG雙核苷酸中胞嘧啶的5’UTR區(qū)，起調(diào)控作用。CpG的胞嘧啶大概有80%被甲基化，20%處于基因調(diào)控區(qū)的CpG島中。BSP甲基化測(cè)序（Bisulfite Genomic Sequencing PCR）的原理通過(guò)對(duì)基因組DNA進(jìn)行重亞硫酸鹽處理，非甲基化的胞嘧啶被脫氨基而轉(zhuǎn)變成尿嘧啶，在隨后的PCR反應(yīng)中尿嘧啶轉(zhuǎn)變成胸腺嘧啶，而甲基化的胞嘧啶不能被脫氨基，在反應(yīng)完成時(shí)被保留，我們將擴(kuò)增得到的PCR產(chǎn)物進(jìn)行TA克隆測(cè)序，就可以分析甲基化發(fā)生的具體情況。該方法實(shí)驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確性高，是甲基化檢測(cè)的金標(biāo)準(zhǔn)。

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