Northern Blot

 原理

在變性條件下將待檢的RNA樣品進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳，繼而按照同Southern Blot相同的原理進(jìn)行轉(zhuǎn)膜和用探針進(jìn)行雜交檢測(cè)。

用途

檢測(cè)樣品中是否含有基因的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物（mRNA）及其含量。

方法與步驟

1. 用具的準(zhǔn)備：

2．用RNAZaP去除用具表面的RNase酶污染用RNAZap擦洗梳子，電泳槽，刀片等，然后用DEPC水沖洗二次，去除RNAZap。

3．制膠：

4. RNA樣品的制備在RNA樣品中加入3倍體積的formaldehyde load dye和適當(dāng)?shù)腅B（終濃度為10ug/ml）�；靹蚝螅�65℃空氣浴15min。短暫低速離心后，立即放置于冰上5min。

5. 電泳：

6. 轉(zhuǎn)膜

7. 探針的制備

8. 探針的純化及比活性測(cè)定：

9．預(yù)雜交：

10．探針變性：

11．雜交：

12．洗膜：

13．曝光：

14．去除膜上的探針：將200ml　0.1%SDS（由DEPC水配制）煮沸后，將膜放入，室溫下讓SDS冷卻到室溫，取出膜，去除多余的液體，干燥后，可以保存幾個(gè)月。

15．雜交結(jié)果

注意事項(xiàng)

操作應(yīng)該小心，但不必緊張。用于RNA電泳、轉(zhuǎn)膜的所有器械、用具均須處理以除去RNAse 酶，以免樣品的降解。轉(zhuǎn)膜時(shí)，注意膜和多孔滲水屏之間不要有氣泡。

服務(wù)周期    45個(gè)工作日