多肽的固相合成
多肽的合成是氨基酸重復(fù)添加的過(guò)程,通常從C端向N端(氨基端)進(jìn)行合成。多肽固相合成的原理是將目的肽的第一個(gè)氨基酸C端通過(guò)共價(jià)鍵與固相載體連接,再以該氨基酸N端為合成起點(diǎn),經(jīng)過(guò)脫去氨基保護(hù)基和過(guò)量的已活化的第二個(gè)氨基酸進(jìn)行反應(yīng),接長(zhǎng)肽鏈,重復(fù)操作,達(dá)到理想的合成肽鏈長(zhǎng)度,最后將肽鏈從樹(shù)脂上裂解下來(lái),分離純化,獲得目標(biāo)多肽。
1、Boc多肽合成法
Boc方法是經(jīng)典的多肽固相合成法,以Boc作為氨基酸α-氨基的保護(hù)基,芐醇類(lèi)作為側(cè)鏈保護(hù)基,Boc的脫除通常采用三氟乙酸(TFA)進(jìn)行。多肽合成時(shí)將已用Boc保護(hù)好的N-α-氨基酸共價(jià)交聯(lián)到樹(shù)脂上,TFA切除Boc保護(hù)基,N端用弱堿中和。
肽鏈的延長(zhǎng)通過(guò)二環(huán)己基碳二亞胺(DCC)活化、偶聯(lián)進(jìn)行,最終采用強(qiáng)酸氫氟酸(HF)法或三氟甲磺酸(TFMSA)將合成的目標(biāo)多肽從樹(shù)脂上解離。在Boc多肽合成法中,為了便于下一步的多肽合成,反復(fù)用酸進(jìn)行脫保護(hù),一些副反應(yīng)被帶入實(shí)驗(yàn)中,例如多肽容易從樹(shù)脂上切除下來(lái),氨基酸側(cè)鏈在酸性條件不穩(wěn)定等。
2、Fmoc多肽合成法
Carpino和Han以Boc多肽合成法為基礎(chǔ)發(fā)展起來(lái)一種多肽固相合成的新方法——Fmoc多肽合成法。
Fmoc多肽合成法以Fmoc作為氨基酸α-氨基的保護(hù)基。其優(yōu)勢(shì)為在酸性條件下是穩(wěn)定的,不受TFA等試劑的影響,應(yīng)用溫和的堿處理可脫保護(hù),所以側(cè)鏈可用易于酸脫除的Boc保護(hù)基進(jìn)行保護(hù)。
肽段的最后切除可采用TFA/二氯甲烷(DCM)從樹(shù)脂上定量完成,避免了采用強(qiáng)酸。同時(shí),與Boc法相比,F(xiàn)moc法反應(yīng)條件溫和,副反應(yīng)少,產(chǎn)率高,并且Fmoc基團(tuán)本身具有特征性紫外吸收,易于監(jiān)測(cè)控制反應(yīng)的進(jìn)行。Fmoc法在多肽固相合成領(lǐng)域應(yīng)用越來(lái)越廣泛。
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