無細(xì)胞蛋白表達(dá)服務(wù)

一、KehongLab無細(xì)胞蛋白表達(dá)技術(shù)內(nèi)容 1.兩種無細(xì)胞蛋白表達(dá)方式
1.1透析式無細(xì)胞重組蛋白表達(dá)系統(tǒng)：用戶需要將模板DNA，細(xì)胞提取液和其他必須的組分混合在一起放入透析袋內(nèi)，并放入特定的緩沖液中。緩沖液中的小分子，包括氨基酸，核苷酸，ATP和其他因子會(huì)與透析袋內(nèi)的小分子進(jìn)行交換，促進(jìn)和提高蛋白質(zhì)產(chǎn)量。
1.2非透析式無細(xì)胞重組蛋白表達(dá)系統(tǒng)：不需透析系統(tǒng)，可直接將模板DNA與蛋白表達(dá)所需大分子及小分子混合，該系統(tǒng)更便于快速操作，但蛋白質(zhì)產(chǎn)量小于上面所述的透析系統(tǒng)。下圖解釋了一個(gè)透析式細(xì)胞外蛋白表達(dá)反應(yīng)的基本設(shè)置 。
 

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透析式無細(xì)胞重組蛋白表達(dá)反應(yīng)示意圖
2.無細(xì)胞重組蛋白表達(dá)模板特點(diǎn)
用于此無細(xì)胞重組蛋白表達(dá)反應(yīng)中的DNA模板可以是Z-PCR產(chǎn)物或DNA質(zhì)粒。該DNA模板（如下圖所示）需要包含一個(gè)T7啟動(dòng)子(T7 promoter)，核糖體結(jié)合位點(diǎn)（RBS;位于ATG起始密碼子上游7–11核酸的位置），ATG起始密碼子(ATG start codon)，終止密碼子(stop codon)和一個(gè)T7終止子(T7 terminator)。

該體系特別適用于大量表達(dá)一些傳統(tǒng)的細(xì)胞內(nèi)體系無法表達(dá)的蛋白，例如：對(duì)宿主細(xì)胞有毒性的蛋白以及膜蛋白等。

二、技術(shù)優(yōu)勢(shì)
●批量/高通量表達(dá)；
●可引入非天然氨基酸；
●高得率（可達(dá)10mg/ml)；
●折疊結(jié)構(gòu)正確均一；
●表達(dá)特異性蛋白；
●蛋白表達(dá)最快只需 6 小時(shí)；
●操作簡(jiǎn)單 可控性高
●一站式純化服務(wù)。

三、應(yīng)用范圍
●膜蛋白的表達(dá)；
●同位素標(biāo)記蛋白和非天然氨基酸標(biāo)記蛋白的表達(dá)；
●毒性蛋白表達(dá)；
●高通量蛋白質(zhì)表達(dá)。
該高通量系統(tǒng)還可以與質(zhì)譜、核磁共振、蛋白結(jié)晶、生化反應(yīng)等下游分析手段結(jié)合，不僅可以縮短實(shí)驗(yàn)時(shí)間，還將讓您在較短的時(shí)間內(nèi)得到更多的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。由于其無可比擬的優(yōu)勢(shì)，不同領(lǐng)域的研究人員已經(jīng)在用它表達(dá)抗體藥物，同位素標(biāo)記蛋白質(zhì)和非天然氨基酸標(biāo)記蛋白質(zhì)，并不斷發(fā)表高質(zhì)量的科學(xué)論著。

四、結(jié)果分析圖例
 
A: SDS-PAGE（10%）對(duì)目標(biāo)蛋白的凝膠分析圖；
1：為未離心過的無細(xì)胞反應(yīng)樣品；
2：為離心后的上清液樣品；
M：為 LMW 蛋白標(biāo)準(zhǔn)樣；
→：為過量表達(dá)的人碳酸酐酶；
B: 15N標(biāo)記的人碳酸酐酶的15N-HSQC核磁共振譜圖。

五、無細(xì)胞蛋白表達(dá)服務(wù)流程
本公司收到質(zhì)粒當(dāng)天或次日即開始微量蛋白表達(dá)實(shí)驗(yàn)；如采用無細(xì)胞蛋白表達(dá)系統(tǒng)， 最快兩日內(nèi)即可獲得表達(dá)實(shí)驗(yàn)結(jié)果并生成實(shí)驗(yàn)結(jié)果報(bào)告。  
 

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服務(wù)流程
●微量蛋白表達(dá)(30 ul反應(yīng)體系）
●批量蛋白表達(dá)（最快2天即可獲得目的蛋白）
●高通量蛋白表達(dá)(—萬種不同蛋白， 最短只需一個(gè)月)