AFLP 遺傳標(biāo)記技術(shù)服務(wù)

AFLP 技術(shù)服務(wù)
 
AFLP標(biāo)記技術(shù)是1993年由荷蘭的Zabeau和Vos博士提出并完善的。現(xiàn)已廣泛應(yīng)用于生物多樣性，指紋圖譜的構(gòu)建，遺傳圖譜的構(gòu)建，基因克隆等諸多研究領(lǐng)域，顯示了廣闊的應(yīng)用前景。AFLP與其他分子標(biāo)記相比具有：1、DNA 用量少；2、可重復(fù)性好；3、多態(tài)性強(qiáng)；4、分辨率高；5、樣品適用性廣，6、對(duì)基因組序列信息依賴性低等優(yōu)點(diǎn)。在物種的多態(tài)性分析中獲得廣泛的應(yīng)用。AFLP的選擇擴(kuò)增產(chǎn)物目前主要通過兩種方法進(jìn)行分離檢測(cè)，傳統(tǒng)的聚丙烯酰胺凝膠電泳（PAGE）的方法和自動(dòng)化程度較高的毛細(xì)管凝膠電泳進(jìn)行檢測(cè)。
PAGE方法主要是AFLP的選擇擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)過聚丙烯酰胺凝膠電泳得到分離，然后通過銀染將條帶顯現(xiàn)出來(lái)，然后通過照相得到相應(yīng)的圖片，優(yōu)點(diǎn)是引物可以是普通引物，價(jià)格相對(duì)較低，做少量樣本或者大量樣本的引物篩選比較合適，另外還可以對(duì)差異條帶進(jìn)行克隆測(cè)序，獲得差異條帶的序列信息。
毛細(xì)管電泳檢測(cè)方法的優(yōu)點(diǎn)是自動(dòng)化，可以對(duì)大量樣本進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，速度快，后期的條帶讀取可以依靠軟件，降低了人為讀取的標(biāo)準(zhǔn)不一。
1）AFLP實(shí)驗(yàn)路線
前期確認(rèn)階段：試驗(yàn)樣本類型，數(shù)量，引物，簽訂試驗(yàn)合作合同；
試驗(yàn)階段：DNA提取，酶切，預(yù)擴(kuò)增，選擇性擴(kuò)增，電泳檢測(cè)；若需要克隆，進(jìn)行目的條帶的回收并測(cè)序（周期視工作量而定）；
數(shù)據(jù)分析：和客戶詳細(xì)溝通，確認(rèn)分析方案：讀取01矩陣；聚類分析；多樣性分析；多態(tài)位點(diǎn)數(shù)(AP) 、多態(tài)位點(diǎn)百分率( P) 、平均等位基因數(shù)(N a) 、有效等位基因數(shù)(N e) 、Nei′s基因多樣性指數(shù)(H) 、Shannon′s信息指數(shù)( I) 、遺傳分化度(Fst)等。利用NTSYS進(jìn)行聚類分析。
2）目前已經(jīng)進(jìn)行的樣本類型：樹木，草，花卉，昆蟲，魚類，蝦類，真菌等
3）客戶須知：
本公司需要簽訂技術(shù)服務(wù)合作合同；
本公司再試驗(yàn)結(jié)束后，如沒要求，試驗(yàn)樣本將統(tǒng)一銷毀；
本公司不接受具有致病性和潛在危險(xiǎn)的原始樣本，此類樣本請(qǐng)您提供樣本DNA。。
   
 
 
 
 
 
 
 
 

圖1 PAGE檢測(cè)引物篩選圖
 

圖2 毛細(xì)管電泳檢測(cè)大量樣本圖
 
圖4 序列測(cè)定