RealTime PCR技術(shù)服務(wù)

Sunbio為您提供全套實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)服務(wù)，全部實(shí)驗(yàn)皆使用進(jìn)口試劑完成，定量PCR儀器為Corbett Research 公司生產(chǎn)的離心式實(shí)時(shí)定量PCR儀Rotor-Gene 3000。

服務(wù)類別：	分子與細(xì)胞	總訪問(wèn)：	3404
最后更新：	2009-9-15	半年訪問(wèn)：	19
參考報(bào)價(jià)：
立即詢價(jià) 電話咨詢

[發(fā)表評(píng)論] [本類其他服務(wù)] [本類其他服務(wù)商]

分享：微信新浪微博

服務(wù)商：尚柏生物醫(yī)學(xué)技術(shù)（北京）有限公司

查看該公司所有服務(wù) >>

服務(wù)介紹
公司簡(jiǎn)介

RealTime PCR技術(shù)服務(wù)

●熒光定量PCR概述

　　聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(polymerase chain reaction, PCR)自誕生之日起就決定了它不僅是一種高敏感、高特異的檢測(cè)核酸分子的定性方法，而且也是一個(gè)能對(duì)核酸分子進(jìn)行精確定量的有力工具。隨著分子生物學(xué)技術(shù)研究的不斷進(jìn)展，定量PCR技術(shù)取得了突飛猛進(jìn)的發(fā)展，實(shí)時(shí)定量PCR (real-time quantitative PCR)技術(shù)便是一種具有革命性意義的定量PCR技術(shù)。所謂實(shí)時(shí)定量PCR是指在PCR指數(shù)擴(kuò)增期間通過(guò)連續(xù)監(jiān)測(cè)熒光信號(hào)強(qiáng)弱的變化來(lái)即時(shí)測(cè)定特異性產(chǎn)物的量，并據(jù)此推斷目的基因的初始量。

　　目前實(shí)時(shí)定量PCR作為一個(gè)極有效的實(shí)驗(yàn)方法，已被廣泛地應(yīng)用于分子生物學(xué)研究的各個(gè)領(lǐng)域，僅2000-2001年，收錄在Medline上的以real-time PCR為關(guān)鍵詞的文章就達(dá)1000多篇。實(shí)時(shí)PCR技術(shù)較之以前的以終點(diǎn)法進(jìn)行定量的PCR技術(shù)具有無(wú)與倫比的優(yōu)勢(shì)。首先，它不僅操作簡(jiǎn)便、快速高效，而且具有很高的敏感性和特異性。其次，由于是在封閉的體系中完成擴(kuò)增并進(jìn)行實(shí)時(shí)測(cè)定，大大降低了污染的可能性并且無(wú)須在擴(kuò)增后進(jìn)行操作。

　　實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)即是在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號(hào)實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程，最后通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。實(shí)時(shí)熒光定量PCR避免了傳統(tǒng)PCR以終產(chǎn)物檢測(cè)定量產(chǎn)生的偏差，提高實(shí)驗(yàn)的重復(fù)性。該技術(shù)已被廣泛用于檢測(cè)細(xì)胞mRNA表達(dá)量的變化；比較不同組織的mRNA表達(dá)差異；驗(yàn)證基因芯片，siRNA干擾的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

　　Sunbio為您提供全套實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)服務(wù)，全部實(shí)驗(yàn)皆使用進(jìn)口試劑完成，定量PCR儀器為Corbett Research 公司生產(chǎn)的離心式實(shí)時(shí)定量PCR儀Rotor-Gene 3000。

（以上圖片由SUNBIO生命科學(xué)實(shí)驗(yàn)中心數(shù)據(jù)庫(kù)提供。未經(jīng)允許不得轉(zhuǎn)載�。�

●熒光定量化學(xué)原理介紹
☆TaqMan熒光探針
　　PCR擴(kuò)增時(shí)在加入一對(duì)引物的同時(shí)加入一個(gè)特異性的熒光探針，該探針為一寡核苷酸，兩端分別標(biāo)記一個(gè)報(bào)告熒光基團(tuán)和一個(gè)淬滅熒光基團(tuán)。探針完整時(shí)，報(bào)告基團(tuán)發(fā)射的熒光信號(hào)被淬滅基團(tuán)吸收；PCR擴(kuò)增時(shí)，Taq酶的5'-3'外切酶活性將探針酶切降解，使報(bào)告熒光基團(tuán)和淬滅熒光基團(tuán)分離，從而熒光監(jiān)測(cè)系統(tǒng)可接收到熒光信號(hào)，即每擴(kuò)增一條DNA鏈，就有一個(gè)熒光分子形成，實(shí)現(xiàn)了熒光信號(hào)的累積與PCR產(chǎn)物形成完全同步。如圖所示。

☆SYBR Green熒光染料
　　SYBR Green是一種DNA結(jié)合染料，能非特異地?fù)饺氲诫p鏈DNA中去。在游離狀態(tài)下，它不發(fā)出熒光，但一旦結(jié)合到雙鏈DNA中以后，便可以發(fā)出熒光。它的最大優(yōu)點(diǎn)就是可以與任意引物、模板相配合，用于任意反應(yīng)體系中。從經(jīng)濟(jì)角度考慮，它也比其它的探針的價(jià)格要便宜得多。但由于它能與所有的雙鏈DNA結(jié)合，所以一旦反應(yīng)體系中出現(xiàn)非特異擴(kuò)增，那它就會(huì)影響到定量結(jié)果的可靠性與重復(fù)性。要避免這種不利因素，可以通過(guò)選擇良好的引物并優(yōu)化反應(yīng)條件以消除非特異性影響。

●熒光定量PCR中的一些術(shù)語(yǔ)
1. C_T值：熒光信號(hào)有統(tǒng)計(jì)意義顯著增長(zhǎng)(即穿過(guò)閾值線)時(shí)的循環(huán)次數(shù)，或者說(shuō)是從基線到指數(shù)增長(zhǎng)的拐點(diǎn)所對(duì)應(yīng)的循環(huán)次數(shù)。

2. 閾值：閾值的默認(rèn)設(shè)置是3-15個(gè)循環(huán)的熒光信號(hào)的標(biāo)準(zhǔn)偏差的10倍。

3.C_T值與起始模板的量成線性關(guān)系，數(shù)學(xué)原理如圖所示：

●主要實(shí)驗(yàn)步驟如下：

1. 設(shè)計(jì)并合成Realtime PCR引物。
2. 引物溶解后使用Promega的TaqDNA聚合酶進(jìn)行含SG（SYBR® Green）的PCR反應(yīng)的優(yōu)化。
3. 客戶樣品RNA抽提
   實(shí)驗(yàn)對(duì)象為組織樣品，取適量（50-100mg）新鮮組織樣品或正確保存的組織樣品加1ml的RNA抽提試劑Trizol（Invitrogen），勻漿后抽提RNA。
實(shí)驗(yàn)對(duì)象為細(xì)胞樣品，每份樣品取1×106～1×107細(xì)胞，PBS清洗細(xì)胞，去PBS加1ml的RNA抽提試劑Trizol（Invitrogen），裂解后抽提RNA
4. RNA質(zhì)量檢測(cè)
a. 紫外吸收測(cè)定法測(cè)定RNA在分光光度計(jì)260nm和280nm處的吸收值，以計(jì)算其濃度并評(píng)估RNA純度
b. 使用ambion公司的甲醛電泳試劑進(jìn)行變性瓊脂糖凝膠電泳，檢測(cè)RNA純度及完整性。
5. 使用逆轉(zhuǎn)錄酶（Promega）進(jìn)行反應(yīng)，將樣品RNA逆轉(zhuǎn)錄為cDNA。
6. 制備標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品：
進(jìn)行相對(duì)定量，需要先將樣品的目的基因以及管家基因進(jìn)行PCR擴(kuò)增，其產(chǎn)物進(jìn)行梯度稀釋用于做標(biāo)準(zhǔn)曲線。
7. 標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品和待測(cè)樣品分別加入到含SG的RealTime PCR反應(yīng)液中（其中TaqBeadTM熱啟動(dòng)聚合酶來(lái)自Promega公司），進(jìn)行RealTime PCR擴(kuò)增和檢測(cè)。
8. 檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)曲線分析：以對(duì)待測(cè)樣品的目的基因進(jìn)行定量。相對(duì)定量實(shí)驗(yàn)需要進(jìn)一步用樣品的目的基因測(cè)得值除以管家基因測(cè)得值以校正誤差，所得結(jié)果代表某樣品的目的基因相對(duì)含量。
9. 提供實(shí)驗(yàn)報(bào)告：包括詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)方法及實(shí)時(shí)熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)結(jié)果的相關(guān)圖表

●實(shí)時(shí)定量PCR全套技術(shù)服務(wù)收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)
☆實(shí)驗(yàn)步驟
1至9個(gè)標(biāo)本10個(gè)標(biāo)本以上
組織或細(xì)胞RNA抽提
RNA質(zhì)量檢測(cè)
cDNA制備  300元(一個(gè)組織或細(xì)胞標(biāo)本) 270元(一個(gè)組織或細(xì)胞標(biāo)本)
目的基因?qū)崟r(shí)定量PCR
看家基因?qū)崟r(shí)定量PCR
標(biāo)準(zhǔn)曲線制備
數(shù)據(jù)分析   200元(一個(gè)標(biāo)本一個(gè)指標(biāo))
標(biāo)準(zhǔn)曲線制備及看家基因內(nèi)參免費(fèi) 180元(一個(gè)標(biāo)本一個(gè)指標(biāo))
標(biāo)準(zhǔn)曲線制備及看家基因內(nèi)參免費(fèi)

☆全套技術(shù)服務(wù)
您只需提供組織或細(xì)胞標(biāo)本，我們?yōu)槟瓿蒖NA抽提，cDNA制備，實(shí)時(shí)定量PCR，標(biāo)準(zhǔn)曲線制備及數(shù)據(jù)分析的所有步驟。
標(biāo)本的運(yùn)輸費(fèi)用及引物合成費(fèi)用客戶自理
如需制作PCR電泳效果圖，每張(1至9個(gè)標(biāo)本一張)收取100元

尚柏生物醫(yī)學(xué)技術(shù)（北京）有限公司創(chuàng)建于2000年，已經(jīng)獲得國(guó)家經(jīng)營(yíng)三類醫(yī)療器械許可(證號(hào)：京081876)和北京市科學(xué)技術(shù)委員會(huì)認(rèn)定的高新技術(shù)企業(yè)(統(tǒng)一編號(hào)：0611008A21672)。公司總部位于高校云集的北京市海淀區(qū)中關(guān)村科技園區(qū)，座落于中國(guó)鐵路建設(shè)總公司鐵建醫(yī)院。與軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院、301醫(yī)院、305醫(yī)院等國(guó)內(nèi)外知名的科研單位和醫(yī)院緊密為鄰。2007年7月11日，SUNBIO正式被北京中醫(yī)藥大學(xué)授權(quán)為"國(guó)家基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與生命科學(xué)人才培養(yǎng)實(shí)訓(xùn)基地"，SUNB IO不斷積累和總結(jié)實(shí)習(xí)帶教經(jīng)驗(yàn)，使學(xué)生的理論知識(shí)和人生閱歷通過(guò)SUNBIO這個(gè)平臺(tái)得到實(shí)踐和豐富。SUNBIO將不斷加強(qiáng)實(shí)訓(xùn)基地的基礎(chǔ)設(shè)施和人才隊(duì)伍的建設(shè)，逐步完善實(shí)習(xí)教學(xué)模式，爭(zhēng)取成為更多基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)、生命科學(xué)教學(xué)示范單位的人才培養(yǎng)基地。

尚柏生物致力于尖端免疫學(xué)和分子生物學(xué)技術(shù)在科研中的應(yīng)用與推廣，專業(yè)從事免疫檢測(cè)及其他相關(guān)產(chǎn)品的引進(jìn)、服務(wù)和研發(fā)。目前已經(jīng)擁有自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)專利產(chǎn)品6項(xiàng)。尚柏生物公司是一家深受客戶信任的高質(zhì)量服務(wù)供應(yīng)商，通過(guò)高度細(xì)分、全方位的服務(wù)平臺(tái)，向生物制藥和醫(yī)療儀器公司提供生物醫(yī)學(xué)產(chǎn)品測(cè)試，合同研究及開(kāi)發(fā)，以及生物 cGMP 生產(chǎn)服務(wù)。

SUNBIO生命科學(xué)實(shí)驗(yàn)中心作為尚柏生物的核心技術(shù)平臺(tái)，由加拿大籍華人投資人民幣800萬(wàn)元，擁有專業(yè)的實(shí)驗(yàn)室、潔凈的動(dòng)物房和一流的實(shí)驗(yàn)設(shè)備（實(shí)驗(yàn)室總面積達(dá)200平方米擁有儀器設(shè)備20余臺(tái)，較大型儀器設(shè)備有：熒光定量PCR儀器、CO2培養(yǎng)箱、超低溫冰箱、熒光顯微鏡、高速冷凍離心機(jī)、PCR儀、垂直電泳儀、自動(dòng)生化分析儀、紫外分光光度計(jì)、酶標(biāo)儀、超凈工作臺(tái)等）和經(jīng)驗(yàn)豐富的技術(shù)人員，其中助理研究員（博士）4人，實(shí)驗(yàn)師（碩士）12人，已經(jīng)發(fā)表的SCI文章6篇，國(guó)家核心期刊文章20余篇,完整的實(shí)驗(yàn)記錄多達(dá)5000多份。科研項(xiàng)目涵蓋臨床醫(yī)學(xué)、免疫學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、分子生物學(xué)等生命科學(xué)諸多領(lǐng)域，具體的實(shí)驗(yàn)方法有：普通PCR、熒光定量PCR（real-time PCR）、Western印跡、流式、ELISA、免疫組化、細(xì)胞培養(yǎng)、MTT、放免、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物飼養(yǎng)及造模等。同時(shí)本實(shí)驗(yàn)室人員有豐富的新藥研發(fā)企業(yè)工作經(jīng)驗(yàn)，能夠承擔(dān)新藥藥效學(xué)及毒理學(xué)實(shí)驗(yàn)，提供新藥申報(bào)資料、文獻(xiàn)查詢及綜述內(nèi)容的整理服務(wù)。

SUNBIO生命科學(xué)翻譯中心作為尚柏生物旗下全資子公司，專門從事醫(yī)學(xué)、醫(yī)藥類口筆譯的專業(yè)化翻譯公司長(zhǎng)期以來(lái)，SUNBIO翻譯中心為衛(wèi)生部、藥品監(jiān)督管理局下屬多家單位及多家著名跨國(guó)醫(yī)藥企業(yè)提供口、筆譯服務(wù)，獲得一致好評(píng)。SUNBIO翻譯中心以國(guó)內(nèi)知名醫(yī)科、藥科院校，科研院、研究所翻譯專家、教授，醫(yī)學(xué)博士,藥學(xué)博士及外籍（美、英、德、日、韓等）專家為主要依托，云集國(guó)內(nèi)中西醫(yī)專業(yè)翻譯人才，以及國(guó)外留學(xué)回國(guó)人員，致力于國(guó)內(nèi)外中西醫(yī)基礎(chǔ)理論、醫(yī)療、制藥、生物技術(shù)、醫(yī)療器械、化妝品、食品衛(wèi)生、獸醫(yī)等醫(yī)藥相關(guān)行業(yè)的專業(yè)化翻譯服務(wù)。SUNBIO翻譯中心可提供英、日、韓、法、德、俄、意、西班牙等十余種語(yǔ)言的口譯、筆譯服務(wù)。SUNBIO翻譯中心堅(jiān)持奉行“專業(yè)、嚴(yán)謹(jǐn)、快捷”的宗旨，憑借裝備精良的專業(yè)化翻譯隊(duì)伍，以SUNBIO嚴(yán)謹(jǐn)?shù)淖黠L(fēng)，為客戶提供快捷、足不出戶的翻譯產(chǎn)品和服務(wù)。SUNBIO翻譯中心視質(zhì)量為企業(yè)生存之根，效率為生存之本，按照GB/T19002-1994 idt IS9002:1994 標(biāo)準(zhǔn)的要求，建立了先進(jìn)的質(zhì)量管理體系和內(nèi)部管理制度，并全面運(yùn)用全球最先進(jìn)的塔多思(TRADOS)翻譯記憶軟件，以及Freehand、Pagemaker、CorelDraw等制圖排版軟件，竭誠(chéng)為海內(nèi)外廣大客戶提供最佳的專業(yè)化翻譯產(chǎn)品和高品質(zhì)的翻譯服務(wù)。

公司充分依托裝備精良的研究平臺(tái)，結(jié)合自身的技術(shù)優(yōu)勢(shì)和精良的人力資源，始終不懈的跟蹤生命科學(xué)領(lǐng)域發(fā)展的最前沿。目前，公司承擔(dān)眾多科研院校的國(guó)家863、973等科研項(xiàng)目的技術(shù)服務(wù)，通過(guò)我們的高效服務(wù)，全國(guó)眾多客戶在EJP, JBC等雜志上發(fā)表了影響因子較高的SCI論文。協(xié)助近百名研究生進(jìn)行科研選題和課題合作服務(wù)，這些研究生在畢業(yè)答辯時(shí)都獲得了答辯組專家好評(píng)，其中一位已獲得全國(guó)優(yōu)秀博士論文榮譽(yù)。

我們所做的一切都是為了使您的工作更輕松、更快捷。良知使我們不斷拿出和引進(jìn)更好的產(chǎn)品，控制和降低各種成本，為您的研究加油，加速我國(guó)自有成果的開(kāi)發(fā)，最終擺脫對(duì)進(jìn)口產(chǎn)品的依賴。這是一項(xiàng)長(zhǎng)期艱苦的工作，這是一項(xiàng)光榮偉大的工作，這是我們繼續(xù)發(fā)展的動(dòng)力。

售后服務(wù)

快速詢價(jià) 請(qǐng) 登錄或注冊(cè)在線詢價(jià)　(請(qǐng)留下您的聯(lián)系方式，以便供應(yīng)商聯(lián)系您)

* 姓　名：		* 地　區(qū)：
* 單　位：		職　位：
* 手機(jī)/電話：		* E-mail：
請(qǐng)寄產(chǎn)品資料：	需要不需要	請(qǐng)報(bào)價(jià)格：	需要報(bào)價(jià) 不需要報(bào)價(jià)
留　言：	我對(duì)您的“RealTime PCR技術(shù)服務(wù)” 感興趣。請(qǐng)聯(lián)系我并提供報(bào)價(jià)。
驗(yàn)證碼：	換一張