Solexa 測序

Solexa 高通量測序法原理

Solexa 方法是利用單分子陣列測試 genotyping ，此種測序法首先是將 DNA 從細(xì)胞中提取，然后將其打斷到約 100 － 200bp 大小，再將接頭連接到片段上，經(jīng) PCR 擴(kuò)增后制成 Library 。隨后在含有接頭的芯片（ flow cell ）上將已加入接頭的 DNA 片段綁定在 flow cell 上，經(jīng)反應(yīng)，將不同片段擴(kuò)增。在下一步反應(yīng)中，四種熒光標(biāo)記的染料應(yīng)用邊合成邊測序（ Sequencing By Synthesis ）的原理，在每個循環(huán)過程里，熒光標(biāo)記的核苷和聚合酶被加入到單分子陣列中�；パa(bǔ)的核苷和核苷酸片斷的第一個堿基配對，通過酶加入到引物上。多余的核苷被移走。這樣每個單鏈 DNA 分子通過互補(bǔ)堿基的配對被延伸，利用生物發(fā)光蛋白，比如螢火蟲的熒光素酶，可通過堿基加到引物后端時所釋放出的焦磷酸鹽來提供檢測信號。針對每種堿基的特定波長的激光激發(fā)結(jié)合上的核苷的標(biāo)記，這個標(biāo)記會釋放出熒光。熒光信號被 CCD 采集，CCD 快速掃描整個陣列檢測特定的結(jié)合到每個片斷上的堿基。通過上述的結(jié)合，檢測可以重復(fù)幾十個循環(huán)，這樣就有可能決定核苷酸片斷中的幾十個堿基。

Solexa 的這種方法，可在一個反應(yīng)中同時加入 4 種核苷的標(biāo)簽，采用邊合成邊測序（ SBS － sequencing by synthesis ），可減少因二級結(jié)構(gòu)造成的一段區(qū)域的缺失。并具有所需樣品量少，高通量，高精確性，擁有簡單易操作的自動化平臺和功能強(qiáng)大等特點(diǎn)，此反應(yīng)可以同時檢測上億個核苷酸片斷 , 因此在同一個芯片或幾個芯片上花費(fèi)很少（只需常規(guī)方法的 1 ％）的成本就可測試全基因組。

隨著 DNA 測序表達(dá)譜產(chǎn)品（ DNA sequencing ,expression profiling ）以及 microRNA 分析平臺 -Solexa Genome Analysis System. 相繼問世，使得此種方法在更多的領(lǐng)域得到應(yīng)用。

Illumina公司的Solexa測序技術(shù)為廣大用戶提供了強(qiáng)大的下一代測序方法，為目前遺傳分析和功能基因組等熱門研究領(lǐng)域的部分熱門課題提出了全新的應(yīng)用方案。

測序與重測序

無論您需要測定的是整個基因組的序列還是基因組上一個大片斷候選區(qū)域的序列， Illumina Genome Analyzer系統(tǒng)都是當(dāng)今世界上最先進(jìn)、最經(jīng)濟(jì)的平臺。Solexa測序技術(shù)和可逆中止化合物染料（reversible terminator chemistry）奠定了在下一代測序技術(shù)中高質(zhì)量、高通量、低成本數(shù)據(jù)產(chǎn)出的基礎(chǔ)。

表達(dá)譜分析

通過對樣本中數(shù)以百萬計的cDNA標(biāo)簽同時進(jìn)行序列測定，Genome Analyzer系統(tǒng)可以使您對整個轉(zhuǎn)錄組進(jìn)行數(shù)字化的分析，而成本僅僅維持在與目前其他模擬化分析技術(shù)同樣的水平。由于我們的技術(shù)無需利用任何轉(zhuǎn)錄子特異性雜交探針，您可以同時進(jìn)行全基因組轉(zhuǎn)錄子的發(fā)掘與定量分析，而無需事先知道基因組的注釋情況。

小RNA鑒定與定量分析

Solexa測序技術(shù)可以提供一套全新獨(dú)特的，適用于各個物種的小RNA深度鑒定與定量分析研究平臺。通過大量的平行測序，研究人員可以發(fā)掘、鑒定并定量出任何物種全基因組水平的小RNA圖譜。應(yīng)用這種低成本快速測定數(shù)百萬標(biāo)簽序列的新方法，Illumina Genome Analyzer提供了解密小RNA圖譜獨(dú)一無二的方法。