鈣離子熒光染料應(yīng)用詳解
鈣離子熒光染料產(chǎn)品描述
細胞膜電位熒光探針
DiBAC4(3)是一種細胞膜電位敏感的親脂性陰離子熒光染料，DIBAC4(3)本身無熒光，當進人細胞與胞漿內(nèi)的蛋白質(zhì)結(jié)合后才發(fā)出熒光，DIBAC4(3)進入細胞，細胞內(nèi)熒光強度增加，即膜電位增加表示細胞去極化；反之，細胞內(nèi)熒光強度降低即膜電位降低表示細胞超極化。DiBAC4(3)是目前最常用的線粒體膜電位檢測熒光探針
鈣離子熒光探針FLUO-3AM應(yīng)用詳解
一、Fluo-3AM的理化性質(zhì)
顏色及形狀：橘紅色液體
純度：，大于95%（高效液相）
溶解性：溶于DMSO
吸收波長/發(fā)射波長：506nm /526nm(低/高鈣)
消散系數(shù)：86000/Mcm(506nm)
保存與使用：粉狀的FLUO-3AM應(yīng)保存于-20度以上。建議使用DMSO作為溶媒。在溶解前，F(xiàn)LUO-3AM和DMSO均須放置至室溫。溶解過程可能會比較慢。用無水的DMSO溶解的FLUO-3AM長期保存，應(yīng)嚴格密封，并保存于-20度。使用前，將保存液放置至室溫后再打開�？杀苊釧M探針在長期的保存過程中水解。
二、Fluo-3AM的工作原理
FLUO-3廣泛用于長波長的熒光鈣指示劑。其在506NM處被吸收，可以被氬離子激光的488nm激發(fā)光激發(fā)，便于檢測。FLUO-3在沒有同鈣結(jié)合的情況下，無熒光產(chǎn)生。但是，在與鈣結(jié)合后，熒光（526nm）增強至少40倍。Fluo-3 AM是一種可以穿透細胞膜的熒光染料。Fluo-3 AM的熒光非常弱，其熒光不會隨鈣離子濃度升高而增強。Fluo-3 AM進入細胞后可以被細胞內(nèi)的酯酶剪切形成Fluo-3，從而被滯留在細胞內(nèi)。Fluo-3可以和鈣離子結(jié)合，結(jié)合鈣離子后可以產(chǎn)生較強的熒光，最大激發(fā)波長為506nm，最大發(fā)射波長為526nm。實際檢測時推薦使用的激發(fā)波長為488nm左右，發(fā)射波長為525-530nm。
三、Fluo-3AM的應(yīng)用
1、過程概述
用于細胞內(nèi)鈣離子檢測時，F(xiàn)luo-3 AM的常用濃度為5μM。通常用含有5μM的Fluo-3 AM的適當溶液和細胞一起在37℃孵育30-60分鐘進行熒光探針裝載，隨后適當洗滌，洗滌后可以考慮適當再孵育20-30分鐘以確保Fluo-3 AM在細胞內(nèi)完全轉(zhuǎn)變成Fluo-3。然后在流式細胞儀上進行檢測。
2、Fluo-3AM使用液的配置
100ug的Fluo-3AM，分子量是1219.9。按實際需要的摩爾濃度折算，無水DMSO溶解。一般配置成1~5mM的DMSO儲存液。如出現(xiàn)難溶現(xiàn)象，可以用20%的F127的DMSO溶液助溶。
四、注意事項：
1、熒光染料有淬滅問題，應(yīng)盡量避光保存；
2、實驗時注意個人防護，戴手套、口罩；
