干細(xì)胞培養(yǎng)基的使用

 

研究背景：

小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的目前干細(xì)胞培養(yǎng)難點。小鼠的骨髓基質(zhì)細(xì)胞成分復(fù)雜，間充質(zhì)干細(xì)胞比率低，分離培養(yǎng)有一定的難度。廣東醫(yī)學(xué)院的博士研究生陳博士在培養(yǎng)過程中就遇到該問題。他曾成功飼養(yǎng)成人和大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞。但新近培養(yǎng)的小鼠間充質(zhì)干細(xì)胞狀態(tài)就很差。按照自己的分析：細(xì)胞培養(yǎng)操作沒有問題，培養(yǎng)條件也不錯，試劑來源可靠。問題應(yīng)該出現(xiàn)在培養(yǎng)基配方上。陳博士以原來的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)基為基礎(chǔ)，按照導(dǎo)師的提點，修改了配方，但細(xì)胞不好不壞。為此他做了兩次正交，結(jié)果缺總不理想，細(xì)胞狀態(tài)并不穩(wěn)定。陳博士為此焦頭爛額，擔(dān)心下一步的實驗無法進行。經(jīng)朋友介紹找到百恩維公司的技術(shù)支持。

 

解決方案：

百恩維的干細(xì)胞技術(shù)專家了解了陳博士的情況，培養(yǎng)技術(shù)、取材和試劑來源等，覺得不存在大問題；問題主要的原因是培養(yǎng)基的成分配比。建議陳博士重新配制培養(yǎng)基或使用現(xiàn)成的完全培養(yǎng)基。陳博士為了加快實驗進度，直接選用了百恩維小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)基。

 

選用產(chǎn)品：小鼠間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)基 （Catalog No. BW110014）

 

實施步驟：

1、  使用百恩維的小鼠間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)基，進行原代的取材；

2、  同樣時間下，百恩維的培養(yǎng)基的MSC細(xì)胞狀態(tài)明顯優(yōu)于自己配置的培養(yǎng)液；

3、  經(jīng)過傳代，細(xì)胞的狀態(tài)和增殖能力都很好；

4、  成功獲得了足夠進行下一步實驗所需的mouse MSC。

 

結(jié)果分析：細(xì)胞狀態(tài)良好，成梭狀、緊密分布，大小較均勻。目前已經(jīng)傳至20代。對于這次走的彎路，陳博士感慨良多。要高效的完成課題實驗，就需要轉(zhuǎn)變觀念，合理利用和整合現(xiàn)有的各個優(yōu)勢資源，快速達(dá)到實驗?zāi)繕?biāo)。

 

案例分析：目前成功的間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)液主要包含DMEM+FBS+谷氨酰胺+雙抗。其中FBS的品牌和批次對細(xì)胞都會有不同的影響；無菌技術(shù)不成熟的新手，或者無菌條件不完善的實驗室，最好使用雙抗。最后，各成分的配比也有較大影響：大部分間充質(zhì)干細(xì)胞適用低糖，加約10%的FBS等等，對不以尋找配方為目的的干細(xì)胞研究人員，我們建議直接使用經(jīng)過不斷優(yōu)化和嚴(yán)格質(zhì)量檢測的百恩維干細(xì)胞培養(yǎng)基，提高科研效率。