蛋白質(zhì)技術專題：豆粕中尿素酶活性的測定

掌握測定尿素酶活性的各種方法的基本原理及方法步驟。

 

將粉碎的大豆制品與中性尿素緩沖溶液混合，在30℃保持30min后，尿素酶催化尿素水解產(chǎn)生氨的反應。用過量的鹽酸溶液中和所產(chǎn)生的氨，再用氫氧化標準溶液回滴。

 

1、樣品篩：孔徑200μm；

2、酸度計：精度0.02pH，附有磁力攪拌器和滴定裝置；

3、恒溫水�。嚎煽販�30±0.5℃；

4、試管：直徑18mm，長1 50mm，有磨口塞子；

5、精密計時器；

6、粉碎機：粉碎時應不生強熱（如球磨機

7、分析天平．感量0.1mg；

8、移液管；10mL。

 

1、稱取約0.2g已粉碎的試樣，稱準至0.1mg，轉入試管中，（如活性很高的樣品，可只稱0.05g試樣），移入10ml尿素緩沖溶液，立即蓋好試管并劇烈搖動，馬上置于30±0.5℃恒溫水浴中，準確計時保持30min。即刻移人10m1鹽酸溶液，迅速冷卻到20℃。

2、將試管內(nèi)容物全部轉入燒杯，用5ml水沖洗試管兩次，立即用氫氧化鈉標準溶液滴定到pH4.70 。

3、另取試管作空白試驗，移人10ml尿素緩沖液，10ml鹽酸溶液。稱取與上述試樣量相當?shù)脑嚇�，也稱準至0.1mg，迅速加入此試管中。立即蓋好試管并劇烈搖動，將試管置于30±0.5℃的恒溫水浴，同樣準確保持20min，冷卻至20℃，將試管內(nèi)容物全部轉入燒杯，用5mL水沖洗試管兩次，并用氫氧化鈉標準溶液滴定至pH 4.70。

4、以每分鐘每克大豆制品釋放氨的mg量來表示尿素酶的活性（UA），可按下式計算：

 

若試樣經(jīng)粉碎前的預干燥處理時，則其計算如下：

 

由一個分析人員用相同方法，同時或連續(xù)兩次測定結果之間的相差，應不超過平均值的10％，以其算術平均值報告結果。