生物化學技術專題：微生物的糖發(fā)酵試驗

一、單糖發(fā)酵試驗

(一)、實驗原理

單糖發(fā)酵是將葡萄糖，乳糖或麥芽糖等分別加入蛋白胨水培養(yǎng)基內，使其最終濃度為 0.75~1％。并加入一定量酚紅指示劑及小倒管，制成單糖發(fā)酵管，接種細菌經37℃培養(yǎng)18~24小時，若能分解糖產酸則酚紅指示劑由紅變黃，若能分解 甲酸有CO2和H2等氣體形成，小倒管內則聚集有氣泡；不分解，則指示劑不變色。

(二)、實驗材料

1．菌種：大腸桿菌，傷寒桿菌18~24小時瓊脂斜面培養(yǎng)物。

2．培養(yǎng)基：葡萄糖發(fā)酵管，乳糖發(fā)酵管等。

(三)實驗方法

1．將傷寒桿菌，大腸桿菌按照液體接種方法分別接種于葡萄糖及乳糖發(fā)酵管內。

2．置37℃孵箱培養(yǎng)18~24小時。

3． 觀察結果：由于一些細菌能分解某種糖類產酸，所以培養(yǎng)基中PH下降到7.0以下，在酚紅指示劑的顯示下，培養(yǎng)基顏色由紅變黃。產酸者以“+”表示，如果同 時產生氣體，則培養(yǎng)基中小倒管內有氣泡出現，此乃產酸又產氣，以“⊕”表示，不分解，則指示劑不變色，用“-” 表示。

(四)、實驗結果

傷寒桿菌 大腸桿菌

葡萄糖 + ⊕

乳 糖 - ⊕

二、V-P(Voges-Proskauer)試驗

(一)、實驗原理

有些細菌如產氣桿菌，分解葡萄糖產生丙酮酸，丙酮酸脫羧，生成乙酰甲基甲醇，在堿性環(huán)境中被氧化為二乙酰，再與培養(yǎng)基內胍基結合，生成紅色化合物，V—P試驗陽性。

(二)、實驗材料

1．菌種：大腸桿菌，產氣桿菌18~24小時瓊脂斜面培養(yǎng)物。

2．培養(yǎng)基：葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)基。

3．試劑：V-P試劑[40％氫氧化鉀水溶液(內含0.3％肌酸)和6%α-奈酚酒精溶液]。

(三)實驗方法

1. 分別接種大腸桿菌，產氣桿菌于兩支葡萄糖蛋白胨水中。

2. 置37℃培養(yǎng)48小時后，取出分別加入KOH1ml和α-奈酚溶液1ml ,搖勻，靜置試管架上5~15分鐘。

(四)、實驗結果

培養(yǎng)液變?yōu)榧t色為陽性，不變色為陰性。

三、甲基紅試驗

(一)、實驗原理

某 些細菌如大腸桿菌等分解葡萄糖產生丙酮酸，繼而分解為甲酸、乙酸、乳酸等，使培養(yǎng)基PH值降至4.5以下，加入甲基紅指示劑呈紅色，此為陽性反應；若產酸 量少或產生的酸進一步轉化為醇、醛、氣體和水等，則培養(yǎng)基的酸堿度仍在PH 6.2以上，加入甲基紅指示劑呈現黃色，為陰性反應。

(二)、實驗材料

1. 菌種：大腸桿菌，產氣桿菌18~24小時瓊脂斜面培養(yǎng)物。

2. 培養(yǎng)基：葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)基。

3. 試劑：甲基紅試劑。

(三)實驗方法

1. 分別將大腸桿菌，產氣桿菌接種于兩支葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)基中。

2. 置37℃培養(yǎng)2~3天取出，分別滴加甲基紅試劑2~3滴，混勻，觀察結果。

(四)、實驗結果

大腸桿菌：+，產氣桿菌：-。

四、枸櫞酸鹽利用試驗

(一)、實驗原理

枸 櫞酸鹽培養(yǎng)基系一綜合性培養(yǎng)基，其中枸櫞酸鈉為唯一碳源，磷酸二氫銨為唯一氮源。一般細菌能利用磷酸二氫銨作為氮源，但不一定能分解枸櫞酸鹽取得碳源。因 此，根據可否利用枸櫞酸鹽來鑒別細菌，如產氣桿菌可利用枸櫞鹽作為碳源，細菌生長繁殖，形成菌苔，分解枸櫞酸鹽生成堿性碳酸鹽，使培養(yǎng)基PH上升到7.0 以上，由綠色變?yōu)樯钐m色，為枸櫞酸鹽利用試驗陽性；而大腸桿菌則不能分解枸櫞酸鹽，得不到碳源，不能生長，無菌苔形成，培養(yǎng)基顏色不發(fā)生變化，為枸櫞酸鹽 利用試驗陰性。

(二)、實驗材料

1. 菌種：大腸桿菌，產氣桿菌18~24小時瓊脂斜面培養(yǎng)物。

2. 培養(yǎng)基：枸櫞酸鹽斜面。

(三)實驗方法

1. 分別將大腸桿菌，產氣桿菌接種于兩支枸櫞酸鹽斜面培養(yǎng)基。

2. 置37℃恒溫培養(yǎng)24小時后觀察結果。

(四)、實驗結果

產氣桿菌：+（有菌苔生長，培養(yǎng)基變色）

大腸桿菌：-（無菌苔生長，培養(yǎng)基不變色）