免疫學技術(shù)：放射免疫對流電泳

（一）原理

將放射性元素標記的抗體(或抗原)與相應(yīng)的抗原(或抗體)沉淀時,沉淀線通過自顯影而證實。所謂自顯影,就是通過復合物中的標記同位素在蛻變過程中放出的射線,作用于感光材料的鹵化銀晶體而產(chǎn)生潛影,再經(jīng)過顯影把“像”顯示出來。這樣,能檢出肉眼看不見的沉淀線,從而提高反應(yīng)的敏感性,這種方法可應(yīng)用于凝膠中的所有反應(yīng)。

（二）材料

1、放射性同位素標記的抗原或抗體

2、X—射線膠片或全色膠片

3、顯影液與定影液

4、其它同對流免疫電泳

（三）操作方法

1、按對流免疫電泳制備凝膠板并打孔。

2、加樣陰極端孔內(nèi)加抗原,陽極端孔內(nèi)加抗體。在加被檢抗體樣品時,迅速加入標記抗原(2 000~3 000cpm),并使之混合,勿使抗原吸收后再加標記抗原,以免由于標記原的滯面而形成假陽性。

3、電泳電流2.6cm×7.5cm的小板用4mA。

4、電泳后,平板浸在3%HCl中漂洗8h,換液2次。

5、用流水漂洗過夜。

6、干燥室溫或鼓風機吹干。

7、曝光在暗室將膠片切成與平板一樣大小,然后將藥面密接凝膠面,再在膠片上壓一張玻板,用黑布包嚴,皮筋扎緊,曝光時間與所用同位素及保存期有關(guān)。181I,一周內(nèi)5h~10h;1~2周內(nèi)24h;2~3周內(nèi)48h。125I,在2個月內(nèi)10h。

8、沖洗全色膠片沖片方法,水洗、20℃顯影10min、水洗、定影、水洗、涼干,觀察結(jié)果。

（四）結(jié)果判定

在抗原抗體孔之間形成一條清晰的黑色影像者,判為陽性。