聚焦微生物研究-（系列一）

對(duì)存活微生物實(shí)施快速、敏感和特異性檢測(cè)是許多微生物學(xué)研究和質(zhì)控對(duì)照領(lǐng)域的基本需求。real-time PCR 等基于 DNA的擴(kuò)增技術(shù)能夠提供所需的速度和特異性�；罹� PCR 是微生物學(xué)研究的新一代技術(shù)，它將細(xì)胞的存活信息與 PCR 類檢測(cè)法的速度和特異性整合在一起。

活菌 PCR 是一項(xiàng)創(chuàng)新型的技術(shù)，能夠分辨存活和死亡的微生物。QIAGEN 的活菌 PCR 系統(tǒng)中使用了 DNA 的嵌入試劑單疊氮丙啶（PMA）。PMA 是一類能夠在 DNA 水平上區(qū)分微生物存活與否的化學(xué)分子，當(dāng)使用特定波長(zhǎng)的激光激活 PMA 時(shí)，PMA 會(huì)嵌入 DNA 并與之共價(jià)結(jié)合。在后續(xù)的 PCR 反應(yīng)中被修飾 DNA 的擴(kuò)增將受到抑制，從而導(dǎo)致擴(kuò)增信號(hào)降低。

PMA 無(wú)法透過(guò)完整的生物膜結(jié)構(gòu)。這意味著來(lái)自存活微生物的 DNA 由于有完整膜結(jié)構(gòu)包裹而不會(huì)受到 PMA 修飾，因此可以被 PCR 反應(yīng)檢測(cè)出來(lái)。微生物死亡細(xì)胞的膜結(jié)構(gòu)由于失去了其原有的保護(hù)功能，PMA 能夠進(jìn)入細(xì)胞并修飾其中的 DNA。死亡微生物細(xì)胞中被修飾的 DNA 在PCR 反應(yīng)時(shí)受到抑制，從而導(dǎo)致擴(kuò)增信號(hào)降低。

PMA 帶有強(qiáng)正電荷，這意味著它無(wú)法穿透完整的存活細(xì)胞膜。它同時(shí)具有一個(gè)錨定基團(tuán)，能夠在特定波長(zhǎng)的光學(xué)激發(fā)下與 DNA 完成不可逆的結(jié)合反應(yīng)。這一特性使得 PMA 能夠競(jìng)爭(zhēng)超越其他 DNA 嵌入染料與核酸的結(jié)合，成為 QIAGEN 的 BLU-V® Viability 產(chǎn)品線的基礎(chǔ)組件。

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