影響轉(zhuǎn)染實驗的因素簡要介紹

影響轉(zhuǎn)染的因素很多，主要因素有以下幾個。

一、細胞狀態(tài)

在開始轉(zhuǎn)染細胞之前，先制定一個適當?shù)姆N板方案，使細胞密度從轉(zhuǎn)染開始到結(jié)束都保持最佳狀態(tài)。一般低的細胞代數(shù)（<50）能確�；�因型不變。最適合轉(zhuǎn)染的細胞是經(jīng)過幾次傳代后達到指數(shù)生長期的細胞，細胞生長旺盛，最容易轉(zhuǎn)染。

二、DNA質(zhì)量

DNA質(zhì)量對轉(zhuǎn)染效率影響非常大。一般的轉(zhuǎn)染技術(shù)，如脂質(zhì)體等，基于電荷吸引原理，如果DNA不純，帶少量的鹽離子、蛋白、代謝物污染都會顯著影響轉(zhuǎn)染復合物的有效形成和轉(zhuǎn)染的進行。另外，對一些內(nèi)毒素敏感的細胞（如原代細胞，懸浮細胞和造血細胞），需要在質(zhì)粒抽提過程中有效去除脂多糖分子，保證理想的轉(zhuǎn)染效果。

 三、轉(zhuǎn)染方法

不同的細胞適用不同的轉(zhuǎn)染方法，如果實驗室已經(jīng)建立了全套方法，摸出了最佳轉(zhuǎn)染條件，就照做。如果是新細胞系，最好查看其成功轉(zhuǎn)染案例�？蓞⒖嫁D(zhuǎn)染試劑提供的已經(jīng)成功轉(zhuǎn)染的細胞株列表和文獻資料，如果你的細胞適用，可根據(jù)所選轉(zhuǎn)染試劑推薦的方法照做。許多轉(zhuǎn)染方法需要優(yōu)化DNA與轉(zhuǎn)染試劑比例，細胞數(shù)量，培養(yǎng)及檢測時間等。ViaFect轉(zhuǎn)染試劑是有創(chuàng)新型混合脂質(zhì)配方的新生代轉(zhuǎn)染試劑，可用于DNA轉(zhuǎn)染，高效低毒。無需去除血清，導入轉(zhuǎn)染試劑：DNA復合物后，無需洗滌或更換培養(yǎng)基，是目的基因在細胞中表達實驗的推薦選擇。

ViaFect轉(zhuǎn)染試劑用于貼壁細胞轉(zhuǎn)染操作步驟舉例 ：

1、在轉(zhuǎn)染前一天鋪細胞，在轉(zhuǎn)染當天細胞匯合度在75%左右。 

2、轉(zhuǎn)染當天，將以無血清培養(yǎng)基稀釋DNA。再加入適量ViaFect 轉(zhuǎn)染試劑與DNA構(gòu)成適當比例，孵育5-20min。 

3、加入適量轉(zhuǎn)染試劑:DNA混合物至細胞培養(yǎng)孔，輕柔混合。 

4、無需去除血清或更換培養(yǎng)條件。孵育24-48h或適當時間，檢測結(jié)果。無需去除轉(zhuǎn)染混合物。 

5、檢測實驗結(jié)果。 

四、轉(zhuǎn)染試劑

不同細胞系轉(zhuǎn)染效率通常不同，但細胞系的選擇通常是根據(jù)實驗的需要，因此在轉(zhuǎn)染實驗前應根據(jù)實驗要求和細胞特性選擇適合的轉(zhuǎn)染試劑。每種轉(zhuǎn)染試劑都會提供一些已經(jīng)成功轉(zhuǎn)染的細胞株列表和文獻，通過這些資料選擇最適合實驗設計的轉(zhuǎn)染試劑。當然，最適合的是高效、低毒、方便、廉價的轉(zhuǎn)染試劑。如ViaFect轉(zhuǎn)染試劑適用于多種類型的細胞系，成功轉(zhuǎn)染多種類型，包括貼壁細胞，懸浮細胞和干細胞來源的細胞，它在多種難轉(zhuǎn)染的細胞中轉(zhuǎn)染效率更高。另外 ViaFect轉(zhuǎn)染試劑毒性低，能夠在轉(zhuǎn)染過程中保持細胞的生物學和細胞代謝，從而更準確的呈現(xiàn)細胞模型的生物學狀態(tài)。 而且ViaFect轉(zhuǎn)染試劑簡單易用，并可進行反向轉(zhuǎn)染(Reverse Transfection)，無需復雜優(yōu)化。 可以說，同類轉(zhuǎn)染試劑中，ViaFect轉(zhuǎn)染試劑的性價比更高。 （注：反向轉(zhuǎn)染指先在培養(yǎng)板孔中加入DNA：轉(zhuǎn)染試劑混合物，再加入細胞進行轉(zhuǎn)染的方式）

五、載體構(gòu)建

轉(zhuǎn)染載體的構(gòu)建（病毒載體，質(zhì)粒DNA，RNA，PCR產(chǎn)物，寡核苷酸等）也影響轉(zhuǎn)染結(jié)果。病毒載體對特定宿主細胞感染效率較高，但不同病毒載體有其特定的宿主，有的還要求特定的細胞周期，如逆轉(zhuǎn)錄病毒需侵染分裂期的宿主細胞，此外還需考慮一些安全問題（如基因污染）。除載體構(gòu)建外，載體的形態(tài)及大小對轉(zhuǎn)染效率也有不同的影響。如果基因產(chǎn)物對細胞有毒性作用，轉(zhuǎn)染也很難進行，因此選擇組成或可調(diào)控，強度合適的啟動子也很重要，同時做空載體及其它基因的相同載體構(gòu)建的轉(zhuǎn)染正對照可排除毒性影響的干擾。