水生動(dòng)物病害基因組DNA/RNA提取試劑盒使用說明書

水生動(dòng)物病害基因組DNA/RNA提取試劑盒
一、簡(jiǎn)介
水生動(dòng)物病害基因組DNA/RNA提取試劑盒適合于快速?gòu)乃鷦?dòng)物組織勻漿液中提取高純度的病害基因組核酸。試劑盒基于硅膠柱純化技術(shù)，提取過程中無需使用有毒的酚氯仿抽提，也無需進(jìn)行耗時(shí)的醇類沉淀，獲得的核酸可直接用于PCR/RT-PCR、Sorthern雜交/Northern雜交、以及LAMP/RT-LAMP等系列下游實(shí)驗(yàn)。 
二、原理
    本試劑盒采用的硅膠柱以高結(jié)合力的玻璃纖維濾膜為基質(zhì)。濾膜在高濃度離子化劑(如鹽酸胍或異硫氰酸胍)條件下，可通過氫鍵和靜電等物理化學(xué)作用吸附核酸，而蛋白質(zhì)和其它雜質(zhì)則不被吸附而去除。吸附了核酸的濾膜經(jīng)洗滌去除殘留的蛋白質(zhì)和鹽，最后可以用DEPC處理水洗脫濾膜上吸附的核酸，得到的核酸純度高，可直接用于各種下游實(shí)驗(yàn)。
水生動(dòng)物病害基因組DNA/RNA提取試劑盒基于硅膠柱純化方式。樣品在裂解液中裂解，核酸釋放到裂解液中。在高鹽的環(huán)境下通過硅膠柱，核酸被吸附在硅膠柱的膜上，而蛋白質(zhì)則不被吸附而去除。后經(jīng)洗滌液洗滌去除鹽分，最后核酸被無核酸酶洗脫液洗脫。
三、組成
                   071011M

組分    含量
管A    48個(gè)
管B    48個(gè)
裂解液    30ml
洗滌液    10ml
洗脫液    36ml
說明書    1份
注意：洗滌液在初次使用前加入40ml無水乙醇，并于室溫保存。

四、保質(zhì)期
水生動(dòng)物病害基因組DNA/RNA提取試劑盒組份可在室溫下（15-25℃）干燥保存12個(gè)月。長(zhǎng)期保存時(shí)需置于2-8℃。

五、需要準(zhǔn)備的材料和工具
無菌生理鹽水
無水乙醇
潔凈的鑷子和剪刀
勻漿機(jī)、均質(zhì)袋或一次性研磨棒
微量移液器（100-1000μl，10-100μl）
無DNase和RNase的滅菌離心管（1.5ml或2ml）
無DNase和RNase的滅菌Tip頭
渦旋振蕩器
離心機(jī)（轉(zhuǎn)速≥10,000rpm）

六、從水生動(dòng)物病害中快速提取DNA/RNA的方法
該方案采用離心操作，適合于快速?gòu)乃鷦?dòng)物組織樣品中提取病害基因組DNA/RNA。以下步驟都在室溫下進(jìn)行。
1．取適量待檢新鮮樣品組織加入1~5倍體積的生理鹽水進(jìn)行勻漿。
2．取200μl勻漿液至1.5ml離心管中，加入500μl裂解液至上清液中，顛倒混勻，靜置5 min裂解病害，離心3 min。
3．把管 A裝在2ml管B中，吸取400μl至管A中，向管A中加入200μl無水乙醇，渦旋混勻20秒。
4．10,000 rpm離心1min。
5．倒棄管B中的濾液，把管 A裝回管B中，加入600 μl洗滌液至管 A中，10,000 rpm離心1min。
6．倒棄管B中的濾液，把管 A裝回管B中，10,000rpm離心2 min。
7．把管 A裝在新的1.5ml離心管中。加入50μl洗脫液至管 A中，靜置1-2min，10,000rpm離心1min，所得溶液即為病害基因組核酸溶液。若暫時(shí)不用，于-80℃儲(chǔ)存。

七、常見問題解答
該列表可能有利于您解決在提取過程中所碰到的問題。若您對(duì)試劑盒存在疑問或有良好的建議，又或者您在分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中碰到問題，都請(qǐng)您聯(lián)系我們。我們將竭盡所能為您排擾解難。

現(xiàn) 象    原 因    解 決 方 法
核酸產(chǎn)量低或無    樣品被反復(fù)解凍    避免反復(fù)凍融樣品。推薦使用新鮮樣品或只解凍過一次的樣品。
    樣品中病害滴度太低    用小量濃縮柱濃縮病害樣品或提高樣品的用量。
    樣品勻漿不充分或裂解不充分    充分勻漿樣品，適當(dāng)延長(zhǎng)裂解時(shí)間。
    洗滌液沒有加入乙醇稀釋    初次使用前，洗滌液必須加入無水乙醇進(jìn)行稀釋
核酸下游應(yīng)用結(jié)果
不理想    核酸濃度太低    減少洗脫時(shí)DEPC水的用量以提高核酸的濃度。
    核酸產(chǎn)量太低或無    參見上面
    乙醇污染    確保按照說明書中的條件進(jìn)行操作，如空柱離心時(shí)速度確保大于等于10,000rpm，離心時(shí)間為1min。
若以上的解答還是無法解決您的問題，請(qǐng)您聯(lián)系我們。