牛胰島素樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白-1檢測(cè)試劑盒標(biāo)本的采集及保存

牛胰島素樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白-1檢測(cè)試劑盒標(biāo)本的采集及保存
1、血清：全血標(biāo)本請(qǐng)于室溫放置2 小時(shí)或4 過(guò)夜后于1000 g 離心20 分鐘，取上清即可檢測(cè)，或?qū)⑸锨逯糜?20 或-80 保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
2、血漿：可用EDTA 或肝素作為抗凝劑，標(biāo)本采集后30 分鐘內(nèi)于1000 g 離心15 分鐘，取上清即可檢測(cè)，或?qū)⑸锨逯糜?20 或-80 保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
3、其它生物標(biāo)本：請(qǐng)1000 g 離心20 分鐘，取上清即可檢測(cè)，或?qū)⑸锨逯糜?20 或-80 保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
注：以上標(biāo)本均應(yīng)密封保存，4 保存應(yīng)小于1 周，-20 不應(yīng)超過(guò)1 個(gè)月，-80 不應(yīng)超過(guò)2 個(gè)月；標(biāo)本溶血會(huì)影響最后檢測(cè)結(jié)果，因此溶血標(biāo)本不宜進(jìn)行此項(xiàng)檢測(cè)。
操作步驟
實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前，各試劑均應(yīng)平衡至室溫，試劑不能直接在37 溶解；試劑或樣品配制時(shí)，均需充分混勻，混勻時(shí)盡量避免起泡。實(shí)驗(yàn)前應(yīng)預(yù)測(cè)樣品含量，如樣品濃度過(guò)高時(shí)，應(yīng)對(duì)樣品進(jìn)行稀釋，以使稀釋后的樣品符合試劑盒的檢測(cè)范圍，計(jì)算時(shí)再乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。
1、加樣：分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔�？瞻卓准訕悠废♂屢�100 ，余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測(cè)樣品100 ，注意不要有氣泡，加樣時(shí)將樣品加于酶標(biāo)板底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻，酶標(biāo)板加上蓋或覆膜，37 溫育2 小時(shí)。為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效性，每次實(shí)驗(yàn)請(qǐng)使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。
2、棄去液體，甩干，不用洗滌。每孔加檢測(cè)溶液A 工作液100 （臨用前配制），酶標(biāo)板加上覆膜，37 溫育1 小時(shí)。
3、棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板3 次，每次浸泡1-2 分鐘，大約400 /每孔，甩干（也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干）。
4、每孔加檢測(cè)溶液B 工作液（臨用前配制）100 ，加上覆膜，37 溫育1 小時(shí)。
5、棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板5 次，方法同步驟3。
6、每孔加底物溶液90 ，酶標(biāo)板加上覆膜37 避光顯色（反應(yīng)時(shí)間控制在15-30 分鐘，當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)孔的前3-4 孔有明顯的梯度藍(lán)色，后3-4 孔梯度不明顯時(shí)，即可終止）。
7、每孔加終止溶液50 ，終止反應(yīng)，此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。
8、立即用酶標(biāo)儀在450nm 波長(zhǎng)測(cè)量各孔的光密度（OD 值）。