從不同的生物或臨床樣本中可以提取的DNA或RNA數(shù)量差異很大。例如,雖然少量的DNA或RNA可以很容易地從過量的組織和細胞中純化(例如從幾毫克的組織中),但許多液體活檢樣本可能會產(chǎn)生極少量的DNA或RNA。事實上,每100μL的尿液或血漿等樣品可能產(chǎn)生1-100 ng或更少的DNA或RNA。測得的濃度最常用的技術是在260 nm(A260)處測定吸光度。然而,即使是新一代的分光光度計,該方法的檢出限仍高于2-10 ng/μL。其他技術,例如使用熒光核酸染色劑,已使每μL范圍的ng或sub-ng更低的DNA或RNA定量成為可能。但是,這可能無法完全克服從液體活檢中定量DNA或RNA的困難,因為預期的DNA或RNA產(chǎn)量可能在每μL范圍內(nèi)較低的pg或sub-pg。
有時候,qPCR實驗會成為阻礙你課題順利開展的強勢攔路虎!看似簡單的基因表達量差異驗證,當遇到低豐富表達的基因時,也許就舉步維艱。模板獲取困難導致的RNA提取量少或RNA質(zhì)量不佳,即使選用最佳的試劑、篩選出最良好的引物,也有可能qPCR定量得到的內(nèi)參基因CT值在18-20個cycle,而目的基因在31-35個循環(huán)。遇到這種情況,你是怎么解決的呢?
基因的豐度是指基因在基因組中的絕對拷貝數(shù)?煞譃楦哓S度,中等豐度和低豐度。低豐度是指目的基因在基因組中的拷貝數(shù)低,可簡單認為2ng 總RNA中低于100個拷貝數(shù)的基因。從qPCR實驗結果來講,當擴增效率為100%,模板加入量在1-10ng范圍內(nèi),qPCR得到的CT值高于28時即可認為低豐度基因。
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產(chǎn)品名稱及描述 | 貨號 | 規(guī)格 | 試劑盒實物圖 |
Low Abundance DNA Quantification Kit | 57200 | 48次反應 | ![]() |
Low Abundance RNA Quantification Kit | 58900 | 48次反應 | ![]() |
低豐度核酸(DNA和RNA)定量試劑盒特點和優(yōu)勢:
【低豐度DNA定量試劑盒(貨號57200),廠家測試結果】:
DNA定量的靈敏度:低豐度DNA定量試劑盒與其他方法相比。上圖代表不同DNA定量方法的動態(tài)范圍。該試劑盒可以定量從pg和sub-pg范圍內(nèi)的低豐度樣品中純化的DNA。
使用低豐度DNA定量試劑盒在皮克范圍內(nèi)進行DNA定量的靈敏度。代表性qPCR基線圖顯示了DNA標準品稀釋梯度的擴增。 可以從低豐度樣品如液體活檢樣品(如血漿或尿液)中定量純化的DNA。使用Norgen的試劑盒可定量至500 fg的DNA。
【低豐度RNA定量試劑盒(貨號58900),廠家測試結果】:
RNA定量的靈敏度:低豐度RNA定量試劑盒(貨號58900)與其他方法相比。上圖代表不同RNA定量方法的動態(tài)范圍。該試劑盒可以定量從pg和sub-pg范圍內(nèi)的低豐度樣品中純化的RNA。
使用低豐度RNA定量試劑盒在皮克范圍內(nèi)進行RNA定量的靈敏度。代表性qPCR基線圖顯示了RNA標準品稀釋梯度的擴增?梢詮牡拓S度樣品如液體活檢樣本(如血漿或尿液)中定量純化RNA?梢远康椭500 fg的RNA。
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Norgen Biotek成立于1998年,公司總部位于加拿大,是一家著名全球化生物技術公司,生產(chǎn)基于專利技術的核酸和蛋白質(zhì)純化及富集產(chǎn)品用于研究和診斷。Norgen Biotek 在2003年獲得加拿大國家研究委員會頒發(fā)的科技創(chuàng)新獎,是一家致力于樣品制備并獲得ISO 9001(產(chǎn)品質(zhì)量)、ISO 13485(產(chǎn)品可用于商業(yè)化的醫(yī)療設備,包括用于體外診斷領域)和ISO 15189(可用于臨床檢測機分子診斷領域的研發(fā)能力)認證的生物科技公司。目前該公司的產(chǎn)品多達700余種,提供一流的樣品制備試劑盒,應用于基因組和蛋白組等不同的領域。
艾美捷科技與國內(nèi)外優(yōu)秀的生物試劑供應商保持著密切的合作關系,目前已成為眾多國際知名品牌的中國總代理或一級代理,主要包括:Abbkine、AAT Bioquest、Abnova、Agrisera、Alomone Labs、Biovision、Biosensis、Cayman Chemical、Caisson Labs、Cytoskeleton、Epigentek、Equitech-Bio、Hycult Biotech、Jackson、LifeSensors、ProSpec、PhytoAB、Norgen Biotek、Mabtech、iRegene、StressMarq、Trevigen、ImmunoReagents、SouthernBiotech、Origene、US Biological、Solis BioDyne等,可以在第一時間為用戶提供最前沿的專業(yè)資訊、完備的產(chǎn)品及物流服務。
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