293T細胞培養(yǎng)常見問題解決方法

名稱	293T [HEK-293T] (人胚腎細胞)
形態(tài)	上皮樣
致瘤性	+
產物或抗原	大T抗原
生長特性	貼壁細胞
營養(yǎng)體系	DMEM（C3113-0500）+10%FBS（C04001）

來源：ATCC官網(wǎng)

 

293 [HEK-293]細胞是經人腺病毒5（Ad5）轉染而形成的人胚腎細胞永生化細胞系，293細胞包含并表達轉染的Ad5基因。

 

293T細胞是293 [HEK-293]細胞株插入了SV40 T-antigen的溫度敏感基因形成的高轉衍生株，廣泛用于病毒包裝。其有多種衍生株，比如HEK293，293T/17等，來源都是人胚胎腎細胞，其極少表達細胞外配體所需的內生受體，且比較容易轉染，是一個很常用的表達研究外源基因的細胞株。

 

293T細胞廣泛應用于病毒包裝，用磷酸鈣轉染效率可高達50%。蛋白表達水平高，轉染后2-3天用堿性磷酸酶分析可較容易地檢測到表達的蛋白。瞬時轉染293T細胞是過表達蛋白并獲得細胞內及細胞外（分泌的或膜上）蛋白的便捷方式。

 

 

 

細 胞 特 性  .VivaCell

1. 貼壁性差

   對貼壁因子很有要求，最好進行包被；也可以提高血清比例來嘗試觀察一下；注意板材的親水性，細胞貼壁疏松，可只用EDTA消化，不要用胰蛋白酶過度消化。

    

2. 增殖迅速

   細胞增殖非�？�，通常倍增時間不到一天，隔天即可長滿，融合率不可過高，需要及時傳代。

 

 

培 養(yǎng) 難 點  .VivaCell

 細 胞 聚 團 嚴 重 

1. 為啥293T細胞傳代后聚團嚴重？

經傳代后嚴重聚團的293T細胞

圖片來源于客戶僅供參考

原因推斷：胰酶消化操作不當導致細胞聚團。

• 消化過度或吹打過猛導致細胞受傷嚴重，破損的細胞碎片容易粘連聚團。

• 消化時細胞融合率太高，成片脫落，將不容易被吹散，容易聚團。

 

解決辦法：鑒于該細胞貼壁疏松，普通0.25%胰酶消化時間控制15s-30s；吹打動作輕柔，控制在10-20次；細胞融合率達到80%傳代即可傳代，不可長的太滿。

 

2. 為啥293T換了血清批次后聚團嚴重？

換血清批次后嚴重聚團的293T細胞

圖片來源于客戶僅供參考

 

原因推斷：血清來源于動物，其組成成分有1000種左右，且血清組成及含量常隨供血動物的年齡、生理條件和營養(yǎng)條件而異。每個批號的組分百分比含量都是不固定的，所以批間差異是存在的。293T細胞本身有聚團生長特性，但嚴重聚團可能受到血清里的某些因子刺激。

 

解決辦法：先用血清試用裝，試用效果好，可購買和血清試用裝批次相同的正裝，囤積半年或一年的用量，有效避免批間差對細胞的影響（胎牛血清在-20℃保存可達5年）。

 

 

 貼 壁 性 差 

1. 為什么用了新批號的血清，293T細胞貼壁性變差？

貼壁疏松的293T細胞

圖片來源于客戶僅供參考

原因推斷：血清存在批間差異，而293T細胞本身特點就是貼壁性差，對不同批次的血清適應性不同，就容易出現(xiàn)貼壁疏松現(xiàn)象。

 

解決辦法：可適當加高血清比例（最高不超過20%）；建議試好一個血清批次多囤一些，可以避免血清批間差對細胞的影響。

 

2. 為啥293T細胞從瓶里（例如T25）鋪板到孔里（96孔板），貼壁性變差？
 

原因推斷：排除掉瓶和孔板本身材質或TC（親水處理）處理因素外，293T細胞貼壁性變差極有可能是因為空間的隔離導致細胞自分泌或旁分泌產生的信號分子濃度太低，不利于細胞的貼壁或增殖。

 

解決辦法：在鋪板前，對孔板進行明膠（BI：01-944）包被，可有效促進細胞貼壁。

 

 

 轉 染 病 毒 后 細 胞 凋 亡 嚴 重 

1. 為啥293T細胞轉染病毒后凋亡嚴重？

經病毒轉染后漂浮凋亡的293T細胞

圖片來源于客戶僅供參考

 

原因推斷：在排查了方法步驟和轉染試劑，依然沒有改善的情況下，可排查一下轉染前的營養(yǎng)體系，尤其是血清批間差帶來的影響。很多同學說前期培養(yǎng)細胞形態(tài)正常呀，其實細胞形態(tài)學只是鑒別細胞是否健康的一個外在指標，還要結合細胞其它指標對細胞健康進行評定（比如倍增時間，存活率）。

 

解決辦法：通過更換血清批次，再進行轉染實驗并觀察轉染后的效果，比較分析出原因。

 

 

評 論 征 集  .VivaCell

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