Trypelectase重組胰蛋白酶在現(xiàn)代生物制藥生產過程的作用

國家藥監(jiān)局于2019年9月發(fā)布了《疫苗上市后生產工藝變更研究技術指導原則》（征求意見稿），如果疫苗生產要進行一些符合藥典標準的原輔料的變更，只需備案，即通過變更流程的簡化，鼓勵企業(yè)進行無動物源性原輔料的變更。
 

在現(xiàn)代生物制藥生產過程中，動物源性原料的使用存在的最大潛在危險是可能會引入人畜共患病的潛在病毒。

Trypelectase重組胰蛋白酶專門為疫苗、病毒載體生產設計，提供高效、非動物源和高質量標準的產品。

Trypelectase重組胰蛋白酶的氨基酸序列與豬胰腺來源的胰蛋白酶一致，由大腸桿菌 （E.coli） 重組表達生產�？商娲鷤鹘y(tǒng)動物源胰酶，常用于疫苗，干細胞，免疫細胞治療等細胞培養(yǎng)過程中貼壁細胞消化。

活力單位：25℃，pH7.6，反應體系3.2ml (1cm 光路)，每分鐘酶解BAEE使253nm下的吸收值增加0.003定義為一個活力單位。

主要用途
細胞培養(yǎng)：
（1）原代細胞的獲取，用于組織塊的消化解離
（2）用于貼壁細胞的傳代消化
（3）用于微載體方法培養(yǎng)的細胞消化

可用于解離一系列的貼壁哺乳動物細胞，包括VERO、HEK 293、A529、MRC-5、CEF、CHO、原生人角質細胞以及胚胎干細胞。

特點:
1. GMP生產環(huán)境、藥典標準

2. 穩(wěn)定性

3. 消化效率高，細胞活力好
細胞消化實驗
T25培養(yǎng)的細胞達到90%以上融合后進行消化傳代，去掉細胞培養(yǎng)基，加入10mL PBSS洗一次。之后每瓶加入0.5mL 0.5mg/ml(1x PBS 溶解)的胰酶消化液，放置37℃消化3min，用4.5 mL 完全培養(yǎng)基中和胰酶，并使用移液器輕輕吹散細胞，使用細胞計數(shù)儀檢測細胞數(shù)和活率。將0.33 ×106個細胞傳代到T25培養(yǎng)瓶中。傳代24h后觀察細胞貼壁情況。

重組牛胰蛋白酶(EC 3.4.21.4)是一種絲氨酸蛋白酶，存在于許多脊椎 動物的消化系統(tǒng)中，作為消化酶而起作用。它能切割賴氨酸或精氨酸殘基中的羧基端肽鏈（羧基端如果是脯氨酸除外），由大腸桿菌 （E.coli） 重組表達生產，具有高活性、高純度、GMP生產、符合藥典要求等優(yōu)點，廣泛應用于國內外第三代胰島素制備。
 

酶活：212U/mg protein，活力單位：30℃，pH8.1，反應體 系3.0ml (1cm 光路)，每分鐘酶解TAME使253nm下的吸收值增加 0.001定義為一個U單位。

特點

• 清真生物制品
• 對胰島素類似物特異性切割效果好
• 重組表達，無動物源，可以排除病毒殘留的風險和動物來源的潛在風險
• GMP生產，批次穩(wěn)定性好

應用

• 第三代胰島素的工業(yè)生產
• 蛋白質組學的生物學研究實驗
• 溶解微形態(tài)的血栓和治療胰腺炎癥