巨噬細(xì)胞培養(yǎng)常見問題匯總與解答

一篇文章幫您解決培養(yǎng)巨噬細(xì)胞所有的煩惱~
 

細(xì)胞 · 介紹

►   單核細(xì)胞及由單核細(xì)胞演變而來的具有吞噬功能的巨噬細(xì)胞，稱為單核吞噬細(xì)胞系統(tǒng)。單核細(xì)胞發(fā)生于骨髓的多能干細(xì)胞，循環(huán)于血液中，穿透血管內(nèi)皮進(jìn)入組織內(nèi)，轉(zhuǎn)變?yōu)榫奘杉?xì)胞。單核吞噬細(xì)胞系統(tǒng)在體內(nèi)分布廣，細(xì)胞數(shù)量多，主要分布于疏松結(jié)締組織、肝、脾、淋巴結(jié)、骨髓、腦、肺以及腹膜等處，并依其所在組織的不同而有不同的名稱。

►   單核吞噬細(xì)胞系統(tǒng)的細(xì)胞有很強的吞噬能力，能吞噬異物、細(xì)菌、衰老和突變的細(xì)胞等。此外，也吞噬抗原抗體復(fù)合物，并參與脂質(zhì)與膽固醇代謝，可吞噬和蓄積脂質(zhì)。吞噬的生理意義在于消除體內(nèi)不需要的物質(zhì)，其中巨噬細(xì)胞與淋巴細(xì)胞、粒細(xì)胞、肥大細(xì)胞，在功能上，有互相促進(jìn)和互相抑制的作用。當(dāng)單核吞噬細(xì)胞系的生理功能失調(diào)時，可引起多種疾病。

►   因此，巨噬細(xì)胞常被用來做相關(guān)研究。RAW 264.7細(xì)胞源自Abelson鼠科白血病病毒誘導(dǎo)的腫瘤；在正常培養(yǎng)中，細(xì)胞會出現(xiàn)多邊形和不規(guī)則形狀，并伴有許多偽足的生成，細(xì)胞貼壁能力超強。RAW 264.7細(xì)胞屬免疫細(xì)胞，有多種功能，是研究細(xì)胞吞噬、細(xì)胞免疫和分子免疫學(xué)的重要對象。

名 稱	RAW 264.7（小鼠單核巨噬細(xì)胞白血病細(xì)胞）
形 態(tài)	不規(guī)則形
生長特性	貼壁；細(xì)胞生長速度快，2-3天即可傳一代
營養(yǎng)體系	DMEM（C3113-0500）+ 10%FBS(C04001)

RAW 264.7
小鼠單核巨噬細(xì)胞白血病細(xì)胞

 

►►► 正常細(xì)胞形態(tài)：

剛接種半小時左右剛貼壁時細(xì)胞呈圓形，折光度很好，鏡下觀察如小珍珠狀一個個地散落于培養(yǎng)皿中培養(yǎng)一段時間后一小片一小片的生長，片片不相連。

 

►►► 異常細(xì)胞形態(tài)：

特點：

RAW264.7細(xì)胞極其容易出現(xiàn)偽足（長角）。需要及時觀察細(xì)胞，若出現(xiàn)偽足則提示該傳代了（可能是一天一傳）。

當(dāng)出現(xiàn)少量的偽足可正常傳代，有少數(shù)分化的細(xì)胞是正常的，很難保證可以完全不分化。

分化的細(xì)胞：呈多角形，明顯的體積變大，時常有較長的觸角。

 

►►► 培養(yǎng)的煩惱與解決：

1►胰酶消化刺激RAW 264.7細(xì)胞嚴(yán)重分化

分化的RAW 264.7細(xì)胞

被胰酶消化過的RAW 264.7細(xì)胞表現(xiàn)出明顯的分化現(xiàn)象呈多角形，有較長觸角。

解決辦法：刮取是比較合適的方法。把細(xì)胞培養(yǎng)液倒掉，加入37℃預(yù)溫的PBS，然后刮細(xì)胞，食指和拇指夾緊細(xì)胞刮，細(xì)胞刮橡膠頭刮面切面與平皿平行，用腕力輕輕刮（注意用腕力刮，不要用臂力），切記只能刮一次，不要來回刮和反復(fù)刮，吹打的力度一定要輕，切勿暴力吹打。

 

2►血清批間差刺激RAW 264.7細(xì)胞嚴(yán)重聚團(tuán)

更換血清批次后嚴(yán)重聚團(tuán)的RAW 264.7

原因推斷：血清來源于動物，其組成成分有1000種左右，且血清組成及含量常隨供血動物的年齡、生理條件和營養(yǎng)條件而異。每個批號的組分百分比含量都是不固定的，所以批間差異是存在的。RAW 264.7細(xì)胞本身有聚團(tuán)生長特性，但嚴(yán)重聚團(tuán)可能受到血清里的某些因子刺激。

解決辦法：先用血清試用裝，試用效果好，可購買和血清試用裝批次相同的正裝，囤積半年或一年的用量，有效避免批間差對細(xì)胞的影響（胎牛血清在-20℃保存可達(dá)5年）。

 

3►有分化的細(xì)胞說明細(xì)胞狀態(tài)不好嗎？

個別分化的RAW 264.7細(xì)胞

培養(yǎng)時，無法保證100% 不分化，通過傳代可以將分化比例控制在一定范圍。RAW264.7細(xì)胞生長速度快，2-3天即可傳一代， 傳代時間間隔超過3天很難吹下，每一次接種密度都要控制好。

解決辦法：推薦傳代比例為1:3-1:6；推薦傳代時間：2-3天；推薦傳代融合率：80%-90%。

 

►►► 以下為培養(yǎng)不錯的RAW 264.7細(xì)胞形態(tài)

RAW 264.7細(xì)胞

生長良好的RAW264.7 胞體邊界感清晰，各個喂得圓鼓鼓、胖嘟嘟的，時刻準(zhǔn)備著為人類生命科學(xué)研究而“獻(xiàn)身”。

 

►►► 聽說熱滅活的血清適合培養(yǎng)巨噬細(xì)胞？

最后為大家普及一條知識~

熱滅活可以滅活補體系統(tǒng)。啟動的補體參與溶解細(xì)胞事件，刺激平滑肌收縮，細(xì)胞和血小板釋放組胺，啟動淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞活化。在免疫學(xué)研究中，培養(yǎng)ES細(xì)胞、昆蟲細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞時，推薦使用熱滅活血清。

熱滅活時請將血清置于 56℃水浴30分鐘。最好另加一個盛放與血清等體積水的燒杯并將溫度計插入水中，以水中溫度56℃為計時開始時間，加熱過程中不時輕輕旋轉(zhuǎn)混勻血清。

實驗顯示，對大多數(shù)的細(xì)胞而言，不需要使用熱滅活血清。經(jīng)此處理過的血清對細(xì)胞的生長只有微小的促進(jìn)或完全沒有作用，造成細(xì)胞生長速率降低。同時沉淀物會顯著地增多，這些沉淀物在倒置顯微鏡下觀察呈小黑點或絮狀物，影響細(xì)胞觀察。若非必須，不需要做熱滅活處理。

 

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