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小鼠避暗實驗的三種訓(xùn)練方法

瀏覽次數(shù):1555 發(fā)布日期:2022-5-14  來源:本站 僅供參考,謝絕轉(zhuǎn)載,否則責(zé)任自負
避暗實驗具有方法簡便、指標明確、便于觀察等優(yōu)點,被廣泛應(yīng)用于學(xué)習(xí)和記憶的研究。然而,以往的實驗即使模型成功、藥效滿意亦常出現(xiàn)處理組間差異過小的情況,不利于統(tǒng)計學(xué)處理。影響避暗實驗的主、客觀因素很多,如不嚴格控制則實驗結(jié)果往往缺乏可靠性,筆者在研究工作中發(fā)現(xiàn)不同的訓(xùn)練方法對結(jié)果影響較大,而相關(guān)研究尚未見報道。本實驗旨在通過觀察小鼠避暗實驗不同訓(xùn)練方法對氯胺酮遺忘模型測試效果的影響,為訓(xùn)練方法的選擇提供參考依據(jù)。

避暗儀分為明、暗兩室,其間有一直徑為3cm的圓洞,兩室底部均鋪以銅柵。暗室底部銅柵可通電,電壓通過按鈕調(diào)節(jié),一般為40V,50Hz。實驗分為訓(xùn)練和測試兩部分,訓(xùn)練時暗室底部銅柵通電。

訓(xùn)練

①MOS法:訓(xùn)練在一天內(nèi)完成,先將小鼠放入避暗儀中適應(yīng)環(huán)境3 min,訓(xùn)練時將小鼠背對洞口放入明室內(nèi),其進入暗室受到電擊即取出;

②MOL法:訓(xùn)練在一天內(nèi)完成,小鼠適應(yīng)環(huán)境3min,訓(xùn)練3min;

③MUL法:連續(xù)3天在同一時間將小鼠放入避暗儀中適應(yīng)3min,第三天適應(yīng)完成后開始訓(xùn)練,3min后取出。適應(yīng)環(huán)境和訓(xùn)練時任小鼠在明室和暗室之間自由穿梭,步入潛伏期大于3min者棄去不用。

測試

訓(xùn)練完成24h后將小鼠再次放入明室,記錄其第一次進入暗室所需的時間,即步入潛伏期(step through latency, STL)和5min內(nèi)進入暗室的次數(shù),即錯誤次數(shù)(error times, ETs)。若5min內(nèi)小鼠未進入暗室則STL記為300s,ETs記為0。
 

避暗實驗依鼠類的嗜暗習(xí)性而設(shè)計,小鼠受電擊而減少向暗室移動的行為,屬于被動回避性條件反射。這種暗環(huán)境被動回避可表現(xiàn)出小鼠受電擊后不敢進入暗室而下一次避暗過程再次進入的特點,即應(yīng)激刺激的學(xué)習(xí)性和遺忘性,而應(yīng)激對小鼠記憶亦有損害作用。

在實驗中觀察到剛放入明室的小鼠會出現(xiàn)洗臉、舔毛等刻板動作,可能是陌生環(huán)境刺激所致,這種刺激有增強小鼠應(yīng)激反應(yīng)從而影響訓(xùn)練效果的可能。研究表明,小鼠對新環(huán)境的記憶比回避反應(yīng)更易消退,訓(xùn)練時的應(yīng)激狀態(tài)可能使適應(yīng)失去作用,測試過程小鼠受陌生環(huán)境的刺激,影響記憶的再現(xiàn)。

綜上所述,小鼠對環(huán)境的適應(yīng)程度可能在較大程度上影響了避暗實驗的結(jié)果,多次適應(yīng)限時訓(xùn)練是相對合適的訓(xùn)練方法。

附錄

SuperPAS避暗實驗軟件廣泛用于學(xué)習(xí)記憶功能、認知神經(jīng)科學(xué)、神經(jīng)生理學(xué)、神經(jīng)藥理學(xué)、認知功能退行性變性等實驗研究方面的研究,簡單易操作,容易判別結(jié)果,可信度高,既可單獨作為檢測實驗提供課題參數(shù),也可以作為其他學(xué)習(xí)記憶和認知功能實驗的輔助或預(yù)篩選實驗。

測試指標
  1. 觀察時間:動物完成所有測試所花費的實驗時間。
  2. 總路程:動物在整個實驗中的運行路程,可初步反映動物的活動量大小。
  3. 潛伏期:動物首次進入暗箱并被電擊的時間,潛伏期越長,反映動物記憶越好。
  4. 錯誤次數(shù):整個實驗時間內(nèi),動物總共進入暗箱并被電擊的次數(shù)。
  5. 明箱逗留時間:動物在明箱停留的總時間。
  6. 暗箱逗留時間:動物在暗箱停留的總時間。
  7. 明箱活動路程、暗箱活動路程
  8. 明箱逗留時間比、暗箱逗留時間比
系統(tǒng)構(gòu)成
  1. 通用避暗實驗箱:含攝像頭、照明裝置(燈光亮度可調(diào));
  2. 大小鼠組件:糞便清理盒、電柵欄;
  3. 視頻采集卡:USB高清定制;
  4. SuperShocker動物行為學(xué)主控器:控制加電、燈光、揚聲器;
  5. 視頻線;電源線;軟件安裝U盤;加密狗;
  6. 畫面合成器1臺(選配)
  7. 通用隔音箱:含貓眼裝置、夾層吸音棉
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