你了解細胞凋亡及其檢測的要點嗎？

細胞凋亡（apoptosis）：屬于細胞程序性死亡（Programmed Cell Death，PCD），是由基因控制的細胞自主、有序的死亡，在維持生物體內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定方面發(fā)揮著重要作用。蝌蚪發(fā)育成青蛙的過程中，尾的消失就是生物學中典型的細胞凋亡現(xiàn)象。

 

 

死亡類型，而且具有重要的生物學意義及復雜的分子機制。細胞凋亡的過程大致可分為以下幾個階段：接受凋亡信號→凋亡調(diào)控分子間的相互作用→蛋白水解酶的活化（Caspase）→進入連續(xù)反應過程。
 

 

細 胞 凋 亡 典 型 特 征

從形態(tài)學角度觀察細胞凋亡，其過程是多階段的，首先是細胞體積縮小，連接消失，與周圍的細胞脫離；然后是細胞質(zhì)密度增加，線粒體膜電位消失，通透性改變，釋放細胞色素C到胞漿；核質(zhì)濃縮，核膜核仁破碎；胞膜有小泡狀形成，膜內(nèi)側(cè)磷脂酰絲氨酸翻到膜外表面；Caspase活化，DNA降解成為約180bp-200bp片段；最終可將凋亡細胞遺骸分割包裹為幾個凋亡小體，無內(nèi)容物外溢，因此不引起周圍的炎癥反應。凋亡小體可迅速被周圍專職或非專職吞噬細胞吞噬。

細胞凋亡與疾病的關(guān)系

對于人而言，健康狀況下，機體內(nèi)細胞凋亡處于一個平衡狀態(tài)。當細胞凋亡出現(xiàn)異常，就極易引發(fā)各種疾病。
 

凋亡 過多	心血管疾病	心肌缺血、心力衰竭、再灌注損傷等
	血液疾病	再生障礙性貧血等
	神經(jīng)疾病	阿爾茲海默病、帕金森綜合征等
凋亡 不足	癌癥	肝癌、肺癌、乳腺癌、膀胱癌、卵巢癌等
	自身免疫病	系統(tǒng)性紅斑狼瘡、類風濕性關(guān)節(jié)炎、自身免疫性甲狀腺疾病等

Annexin V檢測凋亡七大要點

1．接種——對數(shù)生長

細胞密度通常不超過1×106/ml，以免引起凋亡。

2. 收集——上清及鐵壁細胞全部收集

部分凋亡細胞可能懸浮于培養(yǎng)上清中，須先收集上清，離心收集沉淀，再消化收集貼壁細胞，合并上清和消化下來的細胞。

3. 消化——選用Accutase酶

選用Accutase酶替代普通胰酶。Accutase酶已經(jīng)在多種細胞系中得到驗證，其消化更溫和，可有效避免因消化過度使細胞膜的磷脂酰絲氨酸外翻，造成假陽性。（對凋亡不明顯的實驗強烈推薦）
 

4. 補償調(diào)節(jié)——陽性質(zhì)控

沒有明顯的凋亡，該如何調(diào)節(jié)補償以及設門？聯(lián)科生物凋亡試劑盒配備陽性質(zhì)控液，補償調(diào)節(jié)so easy！

 

 

5. 電壓——足夠大

大到快要超出邊界。

6. 補償——橫平豎直

3、4象限橫平；2、4象限豎直。

7. 漂亮結(jié)果——黃金分割（三分原則）