實(shí)驗(yàn)室細(xì)胞培養(yǎng)常見問題分析（下）

誤區(qū) 六

急用血清！從-20℃拿出來放在室溫或者37℃條件下解凍！

 

血清在細(xì)胞培養(yǎng)過程中發(fā)揮重要作用。

您是否有過：

1. 將冷凍的血清直接放入37℃水浴鍋中融解，融解后產(chǎn)生很多絮狀的沉淀物

2. 融解后的血清直接使用，每次使用的時候再融解

3. 分裝的血清用不完直接存儲在4℃冰箱，也方便以后使用

4. 融解后的血清顏色有點(diǎn)暗紅，不會質(zhì)量有問題吧？

我們應(yīng)當(dāng)：

當(dāng)我們?nèi)〕隼鋬龅难�清產(chǎn)品，置于4℃冰箱融解，期間需要均勻搖晃，減少沉淀物的產(chǎn)生，肉眼可觀察融解過程中血清顏色的變化，血清的顏色是依據(jù)血紅蛋白含量不同而變化。

融解后按需分裝凍存，避免反復(fù)凍融。

若融解后未能及時用完，存儲在4℃冰箱的時間也不要過久，質(zhì)量會下降也容易形成沉淀物。

血清產(chǎn)品如此貴重，請“正確融解”后使用與保存。

 

 

誤區(qū) 七

不同品牌的血清交替使用于常見細(xì)胞系，效果應(yīng)該不會變化很大！

目前國內(nèi)品牌眾多，給廣大用戶制造了不少“選擇困難”。

心中難免產(chǎn)生過一些想法：

1. 血清營養(yǎng)豐富，不同牌子的效果應(yīng)該差不多

2. 新血清養(yǎng)細(xì)胞不好，提高點(diǎn)濃度應(yīng)該就可以

3. 實(shí)驗(yàn)室一直用這個品牌的血清，沒得問題

4. 細(xì)胞狀態(tài)不好、增殖慢，提高濃度不行就換個品牌

這些想法也支撐大家度過漫長的研究歲月。

事實(shí)上：

1. 血清為混合物，不同品牌/批次血清質(zhì)量存在差異

2. 換品牌/批次需要試用篩選，再囤積足夠量

3. 不同細(xì)胞適用血清品質(zhì)存在差異，可試用篩選

4. 細(xì)胞增殖緩慢需要綜合分析原因，及時排除問題

血清的品牌替換或換批次可能給細(xì)胞帶來的影響：細(xì)胞增殖緩慢、細(xì)胞形態(tài)變化、細(xì)胞實(shí)驗(yàn)結(jié)果不可重復(fù)等。請及時做好細(xì)胞試用與篩選工作，選擇正確的血清開展細(xì)胞培養(yǎng)。

血清市場“百花齊放”，請“正確選擇”血清產(chǎn)品開展細(xì)胞研究。

 

 

誤區(qū) 八

血清滅活后的使用效果更好！

新進(jìn)實(shí)驗(yàn)室的小伙伴們都會跟著師兄師姐學(xué)習(xí)實(shí)驗(yàn)知識與技術(shù)操作，做一個聽話的“寶寶”！

耳邊是否有過這樣的提示：

1. 咱實(shí)驗(yàn)室的血清都是滅活后使用

2. 滅活后有這么多沉淀物，是不是這血清質(zhì)量不好

3. 冷凍的血清直接置于56℃水浴鍋中滅活

首先我們要明確熱滅活的目的是去除血清中的補(bǔ)體蛋白，但滅活的同時會導(dǎo)致血清中某些成分被破壞，如氨基酸、維生素、生長因子等，因而出現(xiàn)一些沉淀物析出是屬于正�，F(xiàn)象。

1. 根據(jù)研究需要和細(xì)胞特性選擇合適的血清

2. 血清滅活后有纖維蛋白等析出，屬正�，F(xiàn)象

3. 局部受熱不均勻，血清質(zhì)量嚴(yán)重受損

如果血清的熱滅活確實(shí)是研究需要，請按照以下程序進(jìn)行：

從-20℃冰箱取出血清后在4℃條件下融解，融解后再置于56℃水浴鍋中水浴30min。

所以，細(xì)胞培養(yǎng)中，血清的“正確使用”尤為重要。

 

 

誤區(qū) 九

細(xì)胞培養(yǎng)一定要加雙抗或三抗，這樣才放心！

這個大家一定不陌生，使用雙抗的目的就像我們每天“戴口罩”一樣。

所以有了這樣的做法：

1. 師兄師姐做細(xì)胞培養(yǎng)都加1%雙抗

2. 細(xì)胞發(fā)生污染直接雙抗使用量加倍或多倍

3. 長期使用同種/多種抗生素，細(xì)胞應(yīng)該是百毒不侵

整個細(xì)胞培養(yǎng)過程中涉及到的試劑、耗材、儀器設(shè)備、人員操作等都可能成為污染源，無菌意識要銘記于心，杜絕模棱兩可。

1. 仔細(xì)查詢細(xì)胞相關(guān)培養(yǎng)特性，無菌操作

2. 做好細(xì)胞污染類型的鑒別，有針對性的處理

3. 長期使用抗生素，容易產(chǎn)生耐藥性

2017年，美國加州大學(xué)的Nadav Ahituv博士在Scientific Reports上發(fā)表文章稱：發(fā)現(xiàn)雙抗的使用會影響人體肝細(xì)胞中基因的表達(dá)與調(diào)控，其中209個基因表達(dá)發(fā)生改變，特別是與藥物和應(yīng)激反應(yīng)相關(guān)的基因。所以請“慎用”抗生素！

請為細(xì)胞健康生長和實(shí)驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確創(chuàng)造一個良好的實(shí)驗(yàn)環(huán)境！

 

誤區(qū) 十

 

細(xì)胞凍存無保護(hù)直接放在-80℃冰箱，無需緩慢降溫！

 

經(jīng)歷了細(xì)胞分離、傳代培養(yǎng)，到最后的細(xì)胞凍存仍然不能掉以輕心。

請注意以下行為：

1. 不管細(xì)胞狀態(tài)如何，先凍存再說

2. 細(xì)胞凍存于-80℃冰箱超過半年

3. 高密度細(xì)胞直接凍存單管

4. 短期內(nèi)要用細(xì)胞，凍存管標(biāo)記可以簡單點(diǎn)或者不清晰

請按照正確的凍存程序，選擇狀態(tài)良好的細(xì)胞，合理凍存種子細(xì)胞，信息標(biāo)記清晰，長期保存細(xì)胞請置于液氮罐中。

1. 凍存前的細(xì)胞狀態(tài)很重要

2. -80℃凍存效果有限，建議長期保存于液氮中

3. 根據(jù)研究需要，合理凍存細(xì)胞量便于長期研究

4. 設(shè)備不定期開啟，長時間容易遺忘或抹掉

手動降溫：4℃ 10 min；-20℃ 30 min；-80℃ 過夜；液氮

所以在細(xì)胞凍存操作過程中，請謹(jǐn)記“慢凍”，減少冰晶的迅速形成后對細(xì)胞的損傷。

 

THE END

 

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