血清沉淀現(xiàn)象原因與應(yīng)對(duì)方法詳解
血清中經(jīng)常會(huì)出現(xiàn)肉眼可見的沉淀，產(chǎn)生的原因有很多。當(dāng)血清中沉淀太多，不免讓人擔(dān)心影響細(xì)胞狀態(tài)。今天，希爾博士學(xué)堂就圍繞血清沉淀，逐一解開大家心中的疑惑。
■ 纖維蛋白（Fibrin）
血清中肉眼可見的沉淀物大多屬于這一類型。由于在生產(chǎn)過程中，血清采集、過濾(3次0.1μm過濾）和灌裝處理都是在低溫條件下快速完成, 此時(shí)血清中纖維蛋白原處于溶解狀態(tài)。但在解凍之后, 血清中纖維蛋白原往往會(huì)發(fā)生凝集形成肉眼可見的沉淀。
■ 磷酸鈣（Calcium Phosphate）
常見的一種沉淀物，會(huì)造成血清渾濁，并且在37℃培養(yǎng)的時(shí)候會(huì)增加。這種沉淀物在倒置顯微鏡下觀察像小黑點(diǎn)，并且由于布朗運(yùn)動(dòng)看上去像在活動(dòng)，因此經(jīng)常被誤認(rèn)為是微生物污染。
■其他成分（Other）
血清中的其他成分也會(huì)形成沉淀，例如膽固醇和其他蛋白沉淀等。
我們可以通過將血清接種在細(xì)菌培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)，觀察是否存在細(xì)菌增殖，并且進(jìn)行革蘭氏染色，觀察判斷是否為微生物污染。
2 不宜37℃預(yù)熱，血清和完全培養(yǎng)基通常室溫預(yù)熱即可；
3 避免反復(fù)凍融；
4 避免紫外線照射；
5 避免2-8℃長(zhǎng)期保存，分裝后-20℃長(zhǎng)期保存，按需溶解。
血清是什么？
血清，指血液凝固后，在血漿中除去纖維蛋白原及某些凝血因子后分離出的淡黃色透明液體或指纖維蛋白原已被除去的血漿。其主要作用是為細(xì)胞培養(yǎng)提供基本營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)、提供激素和各種生長(zhǎng)因子、提供結(jié)合蛋白、提供促接觸和生長(zhǎng)因子，使細(xì)胞貼壁免受機(jī)械損傷、對(duì)培養(yǎng)中的細(xì)胞起到某些保護(hù)作用。作為培養(yǎng)細(xì)胞的好幫手，血清的品質(zhì)決定了細(xì)胞培養(yǎng)的成敗。血清沉淀是什么？
在血清解凍后發(fā)現(xiàn)渾濁及絮狀物質(zhì)時(shí)，不必驚慌，這是正�，F(xiàn)象。常見血清的沉淀物有以下幾種：■ 纖維蛋白（Fibrin）
血清中肉眼可見的沉淀物大多屬于這一類型。由于在生產(chǎn)過程中，血清采集、過濾(3次0.1μm過濾）和灌裝處理都是在低溫條件下快速完成, 此時(shí)血清中纖維蛋白原處于溶解狀態(tài)。但在解凍之后, 血清中纖維蛋白原往往會(huì)發(fā)生凝集形成肉眼可見的沉淀。
■ 磷酸鈣（Calcium Phosphate）
常見的一種沉淀物，會(huì)造成血清渾濁，并且在37℃培養(yǎng)的時(shí)候會(huì)增加。這種沉淀物在倒置顯微鏡下觀察像小黑點(diǎn)，并且由于布朗運(yùn)動(dòng)看上去像在活動(dòng)，因此經(jīng)常被誤認(rèn)為是微生物污染。
■其他成分（Other）
血清中的其他成分也會(huì)形成沉淀，例如膽固醇和其他蛋白沉淀等。
血清產(chǎn)生沉淀的機(jī)理
- 血清沉淀的形成機(jī)理多種多樣，具體的機(jī)理尚不十分明確。
- 血清沉淀的多少與血清質(zhì)量不成正比。如有血清沉淀產(chǎn)生，不必?fù)?dān)憂，通常若想去除沉淀，我們建議您采用2000 rpm離心5 min，去除大顆粒沉淀，取上清液使用即可。
- 血清不建議過濾后使用，過濾可能會(huì)導(dǎo)致血清中部分營(yíng)養(yǎng)成分的流失。
血清沉淀是污染嗎？
前面提到過磷酸鈣在倒置顯微鏡下像小幅振動(dòng)的小黑點(diǎn)，容易被誤認(rèn)為是微生物污染，但其實(shí)血清沉淀并不是污染。由于在37℃的溫度下培養(yǎng)，會(huì)加劇磷酸鈣顆粒產(chǎn)生，故空培血清驗(yàn)證污染的方法也不太合理。我們可以通過將血清接種在細(xì)菌培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)，觀察是否存在細(xì)菌增殖，并且進(jìn)行革蘭氏染色，觀察判斷是否為微生物污染。
血清沉淀會(huì)影響細(xì)胞生長(zhǎng)嗎？
血清出現(xiàn)沉淀是血清的正常特性，各大品牌的血清均有沉淀的出現(xiàn)，根據(jù)逍鵬多年細(xì)胞培養(yǎng)測(cè)試經(jīng)驗(yàn)，血清沉淀的多少與血清的使用效果沒有必然關(guān)系。建議更換新批次血清的時(shí)候，取少量細(xì)胞進(jìn)行試培養(yǎng)，以確定是否影響后續(xù)細(xì)胞生長(zhǎng)。如何避免沉淀出現(xiàn)？
正確的解凍方法
- 應(yīng)按照逐步解凍的方式正確解凍血清：從-20℃取出后，置于4℃冰箱緩慢解凍，最后置于室溫完成解凍。
- 在解凍過程中，請(qǐng)注意時(shí)不時(shí)緩慢搖晃瓶子，減少沉淀的產(chǎn)生。
- 為避免反復(fù)凍融，建議您將血清分裝使用。
- 直接室溫或者水浴溶解均易造成沉淀增多。
正確使用和保存
1 非必須不用熱滅活（熱滅活會(huì)使血清中部分蛋白質(zhì)變性析出，影響血清品質(zhì)）；2 不宜37℃預(yù)熱，血清和完全培養(yǎng)基通常室溫預(yù)熱即可；
3 避免反復(fù)凍融；
4 避免紫外線照射；
5 避免2-8℃長(zhǎng)期保存，分裝后-20℃長(zhǎng)期保存，按需溶解。
總結(jié)
血清產(chǎn)品中出現(xiàn)沉淀屬于常見現(xiàn)象，無(wú)需過多擔(dān)心，并且不會(huì)影響血清的品質(zhì)，對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)而言，也是沒有任何問題的，您可以放心使用。本期的希爾博士學(xué)堂結(jié)束了，我們下期再見！
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