借助假病毒顆粒和螢光素酶報告基因定量檢測病毒侵入的方法

一，什么是病毒

具有感染性，能夠?qū)е录膊〉奈⑿〉姆羌?xì)胞型生物。

 

各種形態(tài)和大小的病毒
 

雖然形態(tài)不一樣，但是大部分的病毒在分子水平上的組成上有一定的相似性
 

二，病毒顆粒的共有元件：

1. 由DNA或RNA組成的基因組（遺傳物質(zhì)）

2. 包裹著病毒基因組的蛋白質(zhì)衣殼（capsid）

3. 某些病毒具有脂質(zhì)包膜（envelope）

4. 介導(dǎo)進(jìn)入宿主細(xì)胞的蛋白

三，病毒的生命周期

 

病毒的侵入階段（virus entry）是開發(fā)抗病毒藥物和疫苗的重要靶點(diǎn)

1. 粘附（Attachment）

2. 穿入（Penetration）

3. 脫衣殼（Uncoating）

4. 生物合成（Biosynthesis）

5. 組裝（Assembly）

6. 釋放（Release）

四，報告基因檢測已廣泛應(yīng)用于病毒研究中

應(yīng)用報告基因技術(shù)的好處：

• 可以消除或減少操作傳染性病毒的需要

• 可以在更低級別的生物安全實(shí)驗(yàn)室中進(jìn)行研究

• 可以加速高風(fēng)險病毒的研究

五，借助假病毒顆粒和螢光素酶報告基因定量檢測病毒侵入

假病毒顆粒（ Pseudotyped Viral Particles，PVPs）

• 病毒衣殼蛋白或包膜蛋白包裹攜帶有報告基因的異源核酸

• 不具備復(fù)制形成病毒全部核酸序列的能力，僅有一輪感染能力

• 可更安全的用于中和抗體及抗病毒藥物檢測

• 利用表達(dá)載體和包裝質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染細(xì)胞，在細(xì)胞內(nèi)組裝形成
 

我們可以通過收集培養(yǎng)基上清，裂解細(xì)胞獲得假病毒顆粒，獲得假病毒顆粒后，用它來感染帶有相應(yīng)受體的細(xì)胞，72h后經(jīng)過粘附，穿入和脫衣殼，病毒攜帶的報告基因會在細(xì)胞內(nèi)表達(dá)，通過檢測報告基因的表達(dá)水平，就可以判斷病毒侵入的水平。 這里的報告基因是螢光素酶，螢光素酶更適用于定量檢測的報告基因。當(dāng)我們要研究中和抗體實(shí)驗(yàn)的時候可以在病毒最初的粘附階段進(jìn)行相應(yīng)的處理，檢測其對病毒侵入是否有抑制作用。

 

 

假病毒顆粒，其衣殼蛋白或包膜蛋白會包裹攜帶有報告基因的異源核酸，并且這種假病毒顆粒不具備復(fù)制形成病毒全部核酸序列的能力，僅有一輪感染能力。所以可以更安全的用于中和抗體及抗病毒藥物檢測。
 

逐典螢光素酶報告基因

 

針對報告基因檢測不同的側(cè)重需求，逐典推出了3種檢測系統(tǒng)。