HUVEC人臍靜脈內皮細胞形態(tài)及培養(yǎng)指南
人臍靜脈內皮細胞 (HUVEC)，是從臍帶靜脈中分離出來的原代細胞。這種細胞是研究內皮細胞的模型系統(tǒng)，研究相關的低氧、炎癥、氧化應激、感染反應以及正常和腫瘤相關血管生成等應用。
HUVEC細胞形態(tài)：
內皮細胞樣，貼壁生長，鵝卵石狀外觀，核大而暗；
在增殖過程中，細胞小且大小均勻，有絲分裂指數(shù)高，無平滑肌細胞。
細胞形態(tài)圖如下：
產(chǎn)品優(yōu)勢
接下來，小喬給大家分享一下HUVEC詳細培養(yǎng)指南（ 以T25培養(yǎng)瓶為例）：
培養(yǎng)HUVEC相關產(chǎn)品推薦
1.細胞培養(yǎng)瓶/皿包被處理攻略
很多小伙伴認為沒有包被培養(yǎng)瓶似乎對培養(yǎng)影響不大，這里小喬建議大家，復蘇和傳代均需要包被，包被后的細胞長的更圓潤飽滿傳代后的貼壁率也會有所提高。
1、在開始操作程序前，提前準備好所需要的試劑，重組人纖連蛋白、pbs磷酸緩沖液，離心管、移液槍、培養(yǎng)瓶等，以確保盡快完成解凍程序。
2、以 T25 培養(yǎng)瓶為例:吸取2.5mlPBS磷酸鹽緩沖液轉移到T25培養(yǎng)瓶中，再將100ul移液槍調到50，吸50ul重組人纖連蛋白加入到T25培養(yǎng)瓶中，加完之后要混勻鋪滿整個瓶子底部 ；
包被時間:過夜(12-16h)，至少也需 37℃,2h 以上。
注意事項：細胞復蘇或傳代之前培養(yǎng)瓶需提前2小時包被。
2.HUVEC細胞解凍復蘇攻略
1、提前室溫平衡人臍靜脈內皮細胞完全培養(yǎng)基。
2、準備一個包被好的培養(yǎng)瓶,把剩余包被液吸盡后加入5ml的dpbs 清洗一遍倒掉,再添加 5ml 室溫平衡完全培養(yǎng)基，同時準備一個15mL離心管,添加5ml含10%血清的其他培養(yǎng)基(用于離心）。
3、將凍存管快速在37℃水浴槽中解凍HUVEC細胞,至細胞完全融化(請在1-2分鐘內完成)。
4、立即取出凍存管75%乙醇擦拭消毒凍存管表面，轉移至生物安全柜，將細胞懸液加入到提前準備好的離心管里。
5、在室溫，200g(1000rpm)離心5min。
6、棄去上清 ,用手指彈松細胞沉淀 ,添加 2ml完全培養(yǎng)基重新懸浮細胞后，接種至1個T25培養(yǎng)瓶中，培養(yǎng)瓶中總共完培5-7ml。“畫8字法”使細胞均勻分布。
7、在 37℃、5%CO2 和 95%空氣條件下進行細胞培養(yǎng),透氣瓶可直接放入培養(yǎng)箱，非透氣請擰松放入培養(yǎng)箱。
8、在復蘇后第二天16h后可觀察貼壁情況,有少量漂浮可以不用換液,約3-4天可進行傳代。
3.HUVEC傳代攻略：
注意：當HUVEC細胞密度達到85%-95%時，即可進行傳代。
1、棄去培養(yǎng)液,用 PBS 洗滌 1-2次;
2、將 Trypsin-EDTA.(0.05%)(中喬新舟 貨號: CSP048)、 內皮細胞培養(yǎng)基、含 10%FBS 其它培養(yǎng)基(用于終止液)置于室溫平衡。
3、棄去培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)基,用 5ml 無鈣鎂離子 PBS 緩沖液(中喬新舟 貨號:ZQ-1300)清洗細胞層盡量去除液體后加入 1ml 的 0.05%胰酶消化液 37℃消化至細胞變圓,用手輕拍瓶尾成流沙樣脫落;脫落率約 80%。
4、此時,立即加入3-5ml其他完培培養(yǎng)基(含10%血清)終止消化,輕柔吹打瓶內3-6下,將細胞懸液轉移到15ml離心管,200g(1000rpm)室溫離心5min;
5、棄上清，用手指彈松細胞細胞沉淀，加入新鮮完全培養(yǎng)基后視推薦傳代比例和細胞計數(shù)后進行接種若干新的T25培養(yǎng)瓶中;培養(yǎng)基t25添加5-7ml；
6、每2天更換一次培養(yǎng)基。
HUVEC細胞形態(tài)：
內皮細胞樣，貼壁生長，鵝卵石狀外觀，核大而暗；
在增殖過程中，細胞小且大小均勻，有絲分裂指數(shù)高，無平滑肌細胞。
細胞形態(tài)圖如下：
產(chǎn)品優(yōu)勢
接下來，小喬給大家分享一下HUVEC詳細培養(yǎng)指南（ 以T25培養(yǎng)瓶為例）：
培養(yǎng)HUVEC相關產(chǎn)品推薦
1.細胞培養(yǎng)瓶/皿包被處理攻略
很多小伙伴認為沒有包被培養(yǎng)瓶似乎對培養(yǎng)影響不大，這里小喬建議大家，復蘇和傳代均需要包被，包被后的細胞長的更圓潤飽滿傳代后的貼壁率也會有所提高。
1、在開始操作程序前，提前準備好所需要的試劑，重組人纖連蛋白、pbs磷酸緩沖液，離心管、移液槍、培養(yǎng)瓶等，以確保盡快完成解凍程序。
2、以 T25 培養(yǎng)瓶為例:吸取2.5mlPBS磷酸鹽緩沖液轉移到T25培養(yǎng)瓶中，再將100ul移液槍調到50，吸50ul重組人纖連蛋白加入到T25培養(yǎng)瓶中，加完之后要混勻鋪滿整個瓶子底部 ；
包被時間:過夜(12-16h)，至少也需 37℃,2h 以上。
注意事項：細胞復蘇或傳代之前培養(yǎng)瓶需提前2小時包被。
2.HUVEC細胞解凍復蘇攻略
1、提前室溫平衡人臍靜脈內皮細胞完全培養(yǎng)基。
2、準備一個包被好的培養(yǎng)瓶,把剩余包被液吸盡后加入5ml的dpbs 清洗一遍倒掉,再添加 5ml 室溫平衡完全培養(yǎng)基，同時準備一個15mL離心管,添加5ml含10%血清的其他培養(yǎng)基(用于離心）。
3、將凍存管快速在37℃水浴槽中解凍HUVEC細胞,至細胞完全融化(請在1-2分鐘內完成)。
4、立即取出凍存管75%乙醇擦拭消毒凍存管表面，轉移至生物安全柜，將細胞懸液加入到提前準備好的離心管里。
5、在室溫，200g(1000rpm)離心5min。
6、棄去上清 ,用手指彈松細胞沉淀 ,添加 2ml完全培養(yǎng)基重新懸浮細胞后，接種至1個T25培養(yǎng)瓶中，培養(yǎng)瓶中總共完培5-7ml。“畫8字法”使細胞均勻分布。
7、在 37℃、5%CO2 和 95%空氣條件下進行細胞培養(yǎng),透氣瓶可直接放入培養(yǎng)箱，非透氣請擰松放入培養(yǎng)箱。
8、在復蘇后第二天16h后可觀察貼壁情況,有少量漂浮可以不用換液,約3-4天可進行傳代。
3.HUVEC傳代攻略：
注意：當HUVEC細胞密度達到85%-95%時，即可進行傳代。
1、棄去培養(yǎng)液,用 PBS 洗滌 1-2次;
2、將 Trypsin-EDTA.(0.05%)(中喬新舟 貨號: CSP048)、 內皮細胞培養(yǎng)基、含 10%FBS 其它培養(yǎng)基(用于終止液)置于室溫平衡。
3、棄去培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)基,用 5ml 無鈣鎂離子 PBS 緩沖液(中喬新舟 貨號:ZQ-1300)清洗細胞層盡量去除液體后加入 1ml 的 0.05%胰酶消化液 37℃消化至細胞變圓,用手輕拍瓶尾成流沙樣脫落;脫落率約 80%。
4、此時,立即加入3-5ml其他完培培養(yǎng)基(含10%血清)終止消化,輕柔吹打瓶內3-6下,將細胞懸液轉移到15ml離心管,200g(1000rpm)室溫離心5min;
5、棄上清，用手指彈松細胞細胞沉淀，加入新鮮完全培養(yǎng)基后視推薦傳代比例和細胞計數(shù)后進行接種若干新的T25培養(yǎng)瓶中;培養(yǎng)基t25添加5-7ml；
6、每2天更換一次培養(yǎng)基。
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