血清在細胞培養(yǎng)中的作用及篩選方法步驟詳解

血清，指血液凝固后，在血漿中除去纖維蛋白原及某些凝血因子后分離出的淡黃色透明液體或指纖維蛋白原已被除去的血漿。
 

血清在細胞培養(yǎng)中的作用主要有以下幾點：

1. 提供對維持細胞指數生長的激素，特別是基礎培養(yǎng)基中沒有或量很少的營養(yǎng)物，還包括一些主要的低分子營養(yǎng)物；

2. 提供結合蛋白，能識別維生素、脂類、金屬和其他激素等，能結合或調變它們所結合的物質活力；

3. 血清中含有一些微量元素，有些情況下結合蛋白質能與有毒金屬和熱原質結合，起到解毒作用；

4. 細胞貼壁、鋪展在塑料培養(yǎng)基質上所需因子來源；

5. 血清蛋白形成了血清的粘度，可以保護細胞免受機械損傷，特別是在懸浮培養(yǎng)攪拌時，粘度起到重要作用；

6. 抑制蛋白酶的作用，在貼壁細胞傳代時可將剩余胰蛋白酶失活，從而保護細胞。

雖然我們對血清的功能清楚，但血清的成份非常復雜，時至今日對其準確的成份、含量及其作用機制仍不清楚，尤其是對其中一些多肽類生長因子、激素和脂類等尚未充分認識；其次血清都是批量生產,各批量之間差異很大，而且血清保存期至多一年，因此，要保證每批血清的相似性極為困難，在細胞培養(yǎng)中避免不了要做血清篩選，那如何篩選血清呢？

先來了解一下我們常用的血清。

目前Hyclone 、Gibico、Biowest、Life-iLab、Gemini等品牌血源用戶相對較多，可信度較高。但由于血清產品的特殊性，同一品牌的血清不同批次的血清也會有很大差異。

血清的種類：現常用血清主要是牛血清、人血清、馬血清等。其中牛血清來源充足、制備技術成熟、經過長時間的應用考驗人們對其有比較深入的理解，故而是常用的血清。牛血清有小牛血清、新牛血清、胎牛血清。胎牛血清是品質高的，因為胎牛還未接觸外界，血清中所含的抗體、補體等對細胞有害的成分最少。

血清的質量標準：

1. 內毒素標準為不高于5EU/ml

2. 總蛋白含量胎牛血清一般范圍是30-40mg/ml，數值偏高偏低都會影響實驗的正常進行

3. 血紅蛋白標準為不高于20mg/dl

4. pH。國產血清、大多高于7.5，進口胎牛血清，大多低于7.5，根據PH的高低可用來初步鑒別血清的來源

5. 微生物。包括細菌、霉菌、支原體、噬菌體、各類病原性病毒等，大多都能清除。大腸桿菌噬菌體無法過濾，很難清除，但對血清質量影響不大。病原性病毒，在國產血清中幾乎90%以上都存在，是影響國產血清質量的重要原因之一

在實際篩選時，主要從血清外觀和實驗操作時細胞的生長狀態(tài)進行。

從外觀上：

1. 顏色：根據血紅蛋白含量的不同，胎牛血清可表現出黃色或紅色，這個指標的意義在于能體現出采血過程的嚴謹規(guī)范程度。胎牛血清或多或少總有點溶血，因為胎牛血清凝血功能差，紅細胞容易破裂；

2. 澄清度：高質量的胎牛血清由于蛋白和脂類等物質含量低，表現為稀薄、清淡；

3. 血清沉淀：血清中的沉淀是由纖維蛋白的凝聚產生，對血清質量沒有影響，沉淀的產生原因跟加工生產方式、是否反復凍融密切相關，在實驗操作中可能會對細胞觀察產生影響。

從性能上：

1. 細胞形態(tài)，在進行血清篩選時首先觀察細胞的生長形態(tài)是否產生明顯變化，以及觀察貼壁細胞的貼壁情況，細胞在不同血清培養(yǎng)中可能會出現形態(tài)上的差異；

2. 倍增時間，一般情況下會選擇倍增時間短的血清，值得注意的是血清的影響會傳至5代，在進行測試時，最好培養(yǎng)五代后進行計倍增時間的計算；

3. 克隆形成率，測試時一般選50、100、200個細胞進行平板克隆測試，平均5d左右換一次液，兩周后染色計數，對比克隆形成情況。