紅細(xì)胞裂解液(RBC Lysis Buffer,10×) 幾點(diǎn)重要的操作步驟

紅細(xì)胞裂解液(RBC Lysis Buffer,10×) 操作步驟：

注意：絕大多數(shù)情況下，應(yīng)使用無菌去離子水稀釋RBC Lysis Buffer(10×)至1×使用，流式細(xì)胞術(shù)除外。

A、組織細(xì)胞樣本的常規(guī)操作

1、制備細(xì)胞懸液: 新鮮組織經(jīng)過胰蛋白酶或膠原酶等消化處理，通過適當(dāng)方法制備成細(xì)胞懸液，離心棄上清。

2、裂解: 加入1×RBC Lysis Buffer，輕柔吹打混勻，裂解1～2min。 3、離心，棄紅色上清。本步驟亦可在室溫下操作。

4、如果發(fā)現(xiàn)紅細(xì)胞裂解不完全，可以重復(fù)上述步驟2和步驟3各一次。

5、洗滌：根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求加入適量PBS、HBSS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液，輕柔混勻重懸沉淀。4℃離心，棄上清，該離心步驟亦可在室溫下操作。

B、組織細(xì)胞樣本的快速操作(無需洗滌)

1、制備細(xì)胞懸液：新鮮組織經(jīng)胰蛋白酶或膠原酶等消化處理，制備細(xì)胞懸液，離心棄上清。

2、裂解：加入細(xì)胞5倍細(xì)胞沉淀體積的1×RBC Lysis Buffer，輕柔吹打混勻裂解。

3、加入PBS、HBSS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液，輕柔混勻。

4、離心5min，棄紅色上清，本離心步驟亦可在室溫下操作。

5、如果發(fā)現(xiàn)紅細(xì)胞裂解不完全，可以重復(fù)上述步驟2～4各一次。

6、根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要用適當(dāng)溶液重懸細(xì)胞沉淀，進(jìn)行計(jì)數(shù)、培養(yǎng)等后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

C、血液樣本的常規(guī)操作

1、取新鮮抗凝血，離心，棄上清。

2、 裂解：加入1×RBC Lysis Buffer，輕柔吹打混勻，裂解1～5min。本操作步驟在4℃條件下操作更佳，亦可在室溫下操作。

3、離心：棄紅色上清。本步驟亦可在室溫下操作。

4、如果發(fā)現(xiàn)紅細(xì)胞裂解不完全，可以重復(fù)上述步驟2和步驟3一次。

5、洗滌： 根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求加入適量PBS、HBSS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液，輕柔混勻重懸沉淀；4℃離心，棄上清，該離心步驟亦可在室溫下操作。

6、根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要用適當(dāng)溶液重懸細(xì)胞沉淀，進(jìn)行計(jì)數(shù)、培養(yǎng)等后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

D、血液樣本的快速操作(無需洗滌)

1、新鮮抗凝血中加入10倍體積的1×RBC Lysis Buffer，輕輕吹打混勻，裂解4～15min。本操作步驟在4℃條件下操作更佳，亦可在室溫下操作。

2、加入 PBS、HBSS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液，輕柔混勻。

3、離心，棄紅色上清。4℃離心效果更佳。

4、如果發(fā)現(xiàn)紅細(xì)胞裂解不完全，可以重復(fù)上述步驟2和步驟3一次。

5、根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要用適當(dāng)溶液重懸細(xì)胞沉淀，進(jìn)行計(jì)數(shù)、培養(yǎng)等后續(xù)實(shí)驗(yàn)。