低豐度靶標(biāo)染色神器：TSA與PSA的使用方法

今天，百螢為大家?guī)�來的是用于�?xì)胞和組織中低豐度靶標(biāo)的高分辨率成像技術(shù)。TSA/PSA是一種成熟的細(xì)胞信號(hào)放大技術(shù)，當(dāng)TSA/PSA與我們光穩(wěn)定性、水溶性卓越的iFluor染料結(jié)合后，產(chǎn)生的熒光信號(hào)具有比傳統(tǒng)免疫組織化學(xué)、免疫細(xì)胞化學(xué)和免疫熒光方法產(chǎn)生的信號(hào)更高的精確度和靈敏度。PSA是美國AAT Bioquest自主研發(fā)的與TSA功能類似的信號(hào)放大方法，其熒光信號(hào)強(qiáng)度比廣泛使用的tyramide（TSA）試劑高10-50倍。感興趣的朋友一起來看看吧！

 

TSA/PSA原理

酪胺信號(hào)放大（TSA）是一種基于辣根過氧化酶（HRP）的催化活性對(duì)靶蛋白或核酸進(jìn)行高密度原位標(biāo)記的酶學(xué)檢測方法。原理為酪胺Tyramide的過氧化物酶反應(yīng)（已標(biāo)記熒光的酪胺在HRP催化H₂O₂下形成共價(jià)鍵結(jié)合位點(diǎn)）產(chǎn)生的大量酶促產(chǎn)物與目標(biāo)蛋白的酪氨酸殘基共價(jià)結(jié)合，從而使目標(biāo)蛋白標(biāo)記上特異的熒光或生物素。
 

圖1.TSA/PSA原理及工作流程圖。通過類似于傳統(tǒng)ICC和IHC方法的工作流程，TSA/PSA試劑可以通過幾個(gè)簡單的步驟實(shí)現(xiàn)對(duì)所需目標(biāo)的靈敏檢測。

 

表1.TSA/PSA技術(shù)與傳統(tǒng)免疫熒光對(duì)比

	TSA/PSA多標(biāo)免疫熒光	傳統(tǒng)免疫熒光
靶點(diǎn)數(shù)目	不受限制（最多可同時(shí)染色7-10種）	一般標(biāo)記3種（含DAPI）,>3種標(biāo)記難度較大
一抗種類	同一種屬的不同抗體即可滿足要求	不同種屬的不同抗體
二抗種類	連接辣根過氧化物酶的同種屬二抗	連接熒光探針的不同種屬二抗
染色策略	任何樣本無需任何染色策略，簡單的重復(fù)前一步的染色過程，樣本/靶點(diǎn)的差異不影響染色過程，使用簡單方便	樣本抗原的空間位置的差異，需要設(shè)計(jì)復(fù)雜的染色策略。樣本/靶點(diǎn)的差異導(dǎo)致染色策略的差異，染色過程復(fù)雜、多變
染色效果	高染色分辨率和染色特異性，信號(hào)強(qiáng)度更強(qiáng),更穩(wěn)定,淬滅時(shí)間更長，無背景影響，各靶點(diǎn)的信噪比大大提高，尤其適合組織基于單細(xì)胞的定量分析	亮度較弱,容易淬滅,各種抗體間存在互相影響，背景較高，對(duì)基于單細(xì)胞的定量分析不利。
實(shí)驗(yàn)成本	同一種屬的一抗和二抗，價(jià)格相對(duì)便宜。 簡單的染色策略和無需任何重復(fù)的預(yù)實(shí)驗(yàn)，即可掌握整個(gè)染色技術(shù)，大大縮小了預(yù)實(shí)驗(yàn)的材料損耗。 一抗和二抗工作濃度更低,單次費(fèi)用更低	不同種屬的抗體價(jià)格存在差異，一般種屬稀少的價(jià)格高。 不同種屬的二抗，價(jià)格存在差異，一般稀少的種屬價(jià)格高。 尋找合適的染色策略，復(fù)雜的多次重復(fù)的預(yù)實(shí)驗(yàn)大大的增加了實(shí)驗(yàn)成本
應(yīng)用范圍	二抗具備通用性，因此實(shí)驗(yàn)室中所有的研究領(lǐng)域均可使用	二抗不具備通用性，實(shí)驗(yàn)室中應(yīng)用領(lǐng)域受到局限

---

 

TSA/PSA特點(diǎn)

TSA	PSA
1.適用廣，多色標(biāo)記 2.多重標(biāo)記可避免抗體種屬交叉問題 3.染色特異性好，信號(hào)強(qiáng)度高，適合低豐度靶標(biāo) 4.石蠟切片樣本熒光染色背景干凈	1.檢測靈敏度提高了100多倍，比標(biāo)準(zhǔn)IHC，ICC，IF方法高出100倍 2.改進(jìn)的熒光信號(hào)比酪胺（TSA）試劑高10至50倍 3.PSA 自由基的更高反應(yīng)性允許在HRP-靶相互作用位點(diǎn)更快速，有效和更穩(wěn)定地標(biāo)記Styramide綴合物。 4.在不犧牲靈敏度的情況下，PSA可以使用更少量的抗體/探針

---

 

實(shí)驗(yàn)結(jié)果展示

圖2.分別用iFluor 488 PSA和Alexa Fluor 488 TSA染色甲醛固定的石蠟包埋人肺腺癌陽性組織的染色結(jié)果圖。人肺腺癌陽性組織切片用兔抗EpCam抗體染色，然后用polyHRP標(biāo)記的山羊抗兔IgG二抗孵育，最后使用iFluor 488 PSA （Cat#45020）和Alexa Fluor 488 TSA分別染色。圖像顯示iFluor 488 PSA與Alexa Fluor 488 TSA相比提高了熒光IHC的靈敏度。

 

圖3.分別用iFluor 488 酪胺和Alexa Fluor 488 酪胺染色甲醛固定的石蠟包埋人肺腺癌陽性組織的染色結(jié)果圖。人肺腺癌陽性組織切片用兔抗EpCam抗體染色，然后用HRP標(biāo)記的山羊抗兔IgG二抗孵育。顯影：iFluor 488 酪胺（左）；Alexa Fluor 488 酪胺（右）。核染色：DAPI

 

圖4.Styramide 超級(jí)信號(hào)放大試劑盒的信號(hào)強(qiáng)度對(duì)比。 （A）將HeLa細(xì)胞固定，透化并用各種濃度的兔抗微管蛋白一抗標(biāo)記，建議的稀釋濃度為：1：500。 然后將細(xì)胞直接與AlexaFluor488綴合的山羊抗兔IgG二抗染色，最后分別與HRP標(biāo)記的山羊抗兔IgG二抗、AlexaFluor 488酪胺和iFluor 488 Styramide（#45205）染色。 使用FITC濾光片組拍攝熒光圖像，并以相同的曝光時(shí)間進(jìn)行分析。 （B）測量相對(duì)熒光信號(hào)強(qiáng)度，并比較不同檢測方法之間的強(qiáng)度。

---

 

相關(guān)產(chǎn)品推薦

分類	貨號(hào)	產(chǎn)品名稱	Ex(nm)	Em(nm)
TSA試劑	45100	iFluor 488 酪胺	491	514
	45105	iFluor 555 酪胺	552	567
	45110	iFluor 647 酪胺	649	665
	11070	AF488 酪胺	491	518
	11075	AF546 酪胺	554	570
	11082	AF594 酪胺	590	617
	11065	Cy3 酪胺	555	565
	11066	Cy5 酪胺	644	665
	11061	Azido-Cy5酪胺	644	665
PSA試劑	45000	iFluor 350 Styramide	345	442
	45020	iFluor 488 Styramide	491	514
	45025	iFluor 546 Styramide	541	557
	45027	iFluor 555 Styramide	552	567
	45030	iFluor 568 Styramide	568	587
	45035	iFluor 594 Styramide	592	619
	45045	iFluor 647 Styramide	649	665
	45050	iFluor 680 Styramide	676	695
	45055	iFluor 700 Styramide	685	710
	45065	iFluor 750 Styramide	749	775
	45070	iFluor 790 Styramide	782	811
試劑盒	45200	iFluor 350 Styramide超級(jí)信號(hào)放大成像試劑盒，含羊抗兔IgG	345	442
	45205	iFluor 488 Styramide超級(jí)信號(hào)放大成像試劑盒，含羊抗兔IgG	491	514
	45220	iFluor 555 Styramide超級(jí)信號(hào)放大成像試劑盒，含羊抗兔IgG	552	567
	45230	iFluor 594 Styramide超級(jí)信號(hào)放大成像試劑盒，含羊抗兔IgG	592	619
	45240	iFluor 647 Styramide超級(jí)信號(hào)放大成像試劑盒，含羊抗兔IgG	649	665

百螢生物是美國AAT Bioquest中國區(qū)域代理商，為您提供AAT Bioquest最優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品、最詳盡的技術(shù)和最前沿的資訊，歡迎來電咨詢！