從多個影響因素入手，提高獲得常用載體工具質(zhì)粒質(zhì)量的方法
除了在科研領(lǐng)域的普遍應(yīng)用，重組質(zhì)粒已廣泛應(yīng)用在多類生物醫(yī)藥產(chǎn)品研發(fā)生產(chǎn)中，例如重組蛋白藥物、質(zhì)粒DNA疫苗、基因治療藥物以及CAR-T藥物等。目前，質(zhì)粒已是基因工程實施過程中的一個基礎(chǔ)工具。
高品質(zhì)質(zhì)粒的獲得是下游各項實驗成功的重要保障。質(zhì)粒提取主要包括三個基本步驟：質(zhì)粒DNA在菌體細(xì)胞內(nèi)的擴繁、質(zhì)粒DNA從菌體細(xì)胞中的裂解釋放和裂解液中游離質(zhì)粒DNA的分離與純化。堿裂解法是最常用的質(zhì)粒DNA提取方法，根據(jù)共價閉合環(huán)狀質(zhì)粒DNA與線性基因組DNA的拓?fù)鋵W(xué)結(jié)構(gòu)差異導(dǎo)致的變性-復(fù)性速率不同進(jìn)行分離，具有得率高，適用廣，提取快速等特點。
質(zhì)粒提取之后，可以使用多種方法評價提取的質(zhì)量。一般評價質(zhì)粒提取效果的指標(biāo)包括得率、純度和超螺旋質(zhì)粒比例和內(nèi)毒素含量。紫外分光光度法一般用于測定質(zhì)粒得率和純度，當(dāng)測值OD260/280=1.7-1.9、OD260/230>2時表示質(zhì)粒純度較好；同時，結(jié)合瓊脂糖凝膠電泳法觀察質(zhì)粒樣品在凝膠中帶型、大小和亮度，可以判斷濃度、超螺旋質(zhì)粒比例和純度（主要是基因組DNA、RNA和蛋白等殘留）。質(zhì)粒樣本在瓊脂糖凝膠中的最理想狀態(tài)是呈現(xiàn)單一的超螺旋條帶，但多數(shù)情況是會呈現(xiàn)2條或3條帶。這是由質(zhì)粒的不同構(gòu)型在凝膠電泳中的泳動速率不同造成的，超螺旋質(zhì)粒跑的最快，其條帶越亮表明質(zhì)粒完整性越好。在對質(zhì)粒DNA純度要求高的應(yīng)用場景中，內(nèi)毒素水平也是一個非常重要的指標(biāo)。內(nèi)毒素含量測定通常采用金標(biāo)準(zhǔn)的鱟試劑法定量檢測，當(dāng)內(nèi)毒素含量低于0.1EU / µg 時，通常被認(rèn)為是無內(nèi)毒素質(zhì)粒。
那么，如何提取到高質(zhì)量的質(zhì)粒、提高下游實驗的成功率呢？經(jīng)驗表明，質(zhì)粒質(zhì)量受多種因素影響，除了試劑盒本身性能外，也與宿主菌株，培養(yǎng)基類型，培養(yǎng)條件，質(zhì)粒類型，質(zhì)粒大小和拷貝數(shù)等有關(guān)。
提取與純化操作
裂解細(xì)菌細(xì)胞并釋放質(zhì)粒的方法有很多，如煮沸法，梯度離心法、堿裂解法等。由于堿裂解法操作簡單，且處理方式溫和，市面上應(yīng)用較多。要獲得高質(zhì)量質(zhì)粒DNA，一定不能忽略菌體裂解步驟，在加入SDS-NaOH后不要劇烈震蕩，容易導(dǎo)致質(zhì)粒DNA斷裂，影響完整性，且易混入小片段基因組DNA，影響質(zhì)粒純度。純化質(zhì)粒目前已發(fā)展出多種方法，如鹽析法、硅膠介質(zhì)吸附法，陰離子交換樹脂法等，鹽析法一般涉及有毒試劑，操作并不友好。陰離子交換樹脂法獲得的質(zhì)粒得率和純度都較好，但成本較高。使用比較廣泛的是硅膠介質(zhì)吸附法，該方法制備的質(zhì)粒得率、純度都較優(yōu)，成本也相對較低，可滿足大部分客戶需求。質(zhì)粒純化時需要考慮不同產(chǎn)品中吸附柱對質(zhì)粒DNA的吸附能力，若樣本質(zhì)粒量很大，可分多次分離純化。漂洗液洗滌后應(yīng)離心盡量去除殘留液體，確保質(zhì)粒中無乙醇?xì)埩�。濟凡質(zhì)粒提取試劑盒具有較優(yōu)的菌體裂解性能和質(zhì)粒純化性能。
保存方法
提取后的質(zhì)粒除了本身質(zhì)量外，也應(yīng)注意提供適宜的保存環(huán)境，以防止質(zhì)粒降解影響下游應(yīng)用，一般質(zhì)�？杀４嬗赥E溶液中，在4℃短期保存，在-80℃或-20℃中長期保存。除了直接保存質(zhì)粒，還應(yīng)將含質(zhì)粒的宿主菌保存于甘油中，-80℃或液氮中可長期保存。
當(dāng)然，除了以上介紹的操作要點之外，一款操作方便、提取效率高的試劑也是必不可少的。濟凡生物是一家集研發(fā)、生產(chǎn)、銷售和技術(shù)服務(wù)為一體的國家高新生物技術(shù)企業(yè)，致力于為科研、工業(yè)醫(yī)療以及生物醫(yī)藥領(lǐng)域提供穩(wěn)定可靠、高性價比的產(chǎn)品解決方案和專業(yè)技術(shù)服務(wù)。濟凡質(zhì)粒大提試劑盒經(jīng)研發(fā)精心設(shè)計優(yōu)化，可以大幅提高質(zhì)粒提取質(zhì)量，解決客戶實驗中可能遇到的得率低，純度低，內(nèi)毒素高等問題，是當(dāng)之無愧的實驗好幫手。
FinePure無內(nèi)毒素質(zhì)粒大提試劑盒（升級版）
- 得率高、純度好：獨特的玻璃纖維素膜吸附技術(shù)，高效專一結(jié)合質(zhì)粒DNA；
- 內(nèi)毒素清除步驟靈活：含內(nèi)毒素清除Buffer，根據(jù)下游不同需求可選擇性加入或去掉該步驟，操作簡單方便，適用范圍廣；
- 時間短：整個提取過程50min左右；
- 應(yīng)用廣：提取的質(zhì)粒可滿足下游克隆、酶切、測序和細(xì)胞轉(zhuǎn)染等實驗
