RAW 264.7細(xì)胞培養(yǎng)攻略及常見問題解決方案
RAW 264.7細(xì)胞源自Abelson鼠科白血病病毒誘導(dǎo)的腫瘤；在正常培養(yǎng)中，細(xì)胞會出現(xiàn)多邊形和不規(guī)則形狀，并伴有許多偽足的生成，細(xì)胞貼壁能力超強(qiáng)。 RAW 264.7細(xì)胞屬免疫細(xì)胞，有多種功能，是研究細(xì)胞吞噬、細(xì)胞免疫和分子免疫學(xué)的重要對象。呈不規(guī)則形，貼壁；細(xì)胞生長速度快，2-3天即可傳一代；營養(yǎng)體系是DMEM+10%FBS。
表1 RAW 264.7細(xì)胞基本信息
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名稱 |
RAW 264.7（小鼠單核巨噬細(xì)胞白血病細(xì)胞） |
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形態(tài) |
不規(guī)則形 |
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生長特性 |
貼壁；細(xì)胞生長速度快，2-3天即可傳一代 |
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營養(yǎng)體系 |
DMEM+10%FBS+1%PS |
圖1 RAW 264.7（小鼠單核巨噬細(xì)胞白血病細(xì)胞）
首先我們討論的第一大問題是胰酶消化對RAW264.7細(xì)胞的刺激分化。如圖2所示：被胰酶消化過的RAW 264.7細(xì)胞表現(xiàn)出明顯的分化現(xiàn)象呈多角形，有較長觸角。
圖2 分化的RAW 264.7（小鼠單核巨噬細(xì)胞白血病細(xì)胞）
圖2 分化的RAW 264.7（小鼠單核巨噬細(xì)胞白血病細(xì)胞）
如何避免細(xì)胞傳代因胰酶而受刺激分化，刮取是比較合適的方法。把細(xì)胞培養(yǎng)液倒掉，加入37℃遇溫的PBS，然后刮細(xì)胞，食指和拇指夾緊細(xì)胞刮，細(xì)胞刮橡膠頭刮面切面與平皿平行，用腕力輕輕刮（注意用腕力刮，不要用臂力），切記只能刮一次，不要來回刮和反復(fù)刮，吹打的力度一定要輕，切勿暴力吹打。
接下來我們討論的第二種情況是為啥RAW 264.7換了血清批次后聚團(tuán)嚴(yán)重？如圖3所示：換血清批次后嚴(yán)重聚團(tuán)的RAW 264.7細(xì)胞，呈片狀分部，片層之間間隔明顯。
圖3 更換血清批次后嚴(yán)重聚團(tuán)的RAW 264.7（小鼠單核巨噬細(xì)胞白血病細(xì)胞）
圖3 更換血清批次后嚴(yán)重聚團(tuán)的RAW 264.7（小鼠單核巨噬細(xì)胞白血病細(xì)胞）
如果您剛好也碰到這種情況，那不妨來了解一下血清批間差：血清來源于動物，其組成成分有1000種左右，且血清組成及含量常隨供血動物的年齡、生理條件和營養(yǎng)條件而異。每個批號的組分百分比含量都是不固定的，所以批間差異是存在的。RAW 264.7細(xì)胞本身有聚團(tuán)生長特性，但嚴(yán)重聚團(tuán)可能受到血清里的某些因子刺激。
怎樣預(yù)防血清批間差導(dǎo)致的細(xì)胞聚團(tuán)呢？先用血清試用裝，試用效果好，可購買和血清試用裝批次相同的正裝，囤積半年或一年的用量，有效避免批間差對細(xì)胞的影響（胎牛血清在-20℃保存可達(dá)5年）。
最后咱們討論的第三大問題是有分化的細(xì)胞說明細(xì)胞狀態(tài)不好嗎？如圖4所示，細(xì)胞群中有個別細(xì)胞出現(xiàn)觸角。
圖4 個別分化的RAW 264.7（小鼠單核巨噬細(xì)胞白血病細(xì)胞）
值得一提的是培養(yǎng)時，無法保證100% 不分化，通過傳代可以將分化比例控制在一定范圍。RAW264.7細(xì)胞生長速度快，2-3天即可傳一代， 傳代時間間隔超過3天更容易分化，很難吹下，每一次接種密度都要控制好。推薦傳代比例為1：3—1：6；推薦傳代時間：2—3天；推薦傳代融合率：80%-90%
看了這么多長觸角的細(xì)胞，我們來看看“馬相”還不錯的RAW 264.7細(xì)胞吧。如圖5和圖6所示，生長良好的RAW 即使融合度達(dá)到很高仍不分化，胞體邊界感清晰，各個喂得圓鼓鼓、胖嘟嘟的，時刻準(zhǔn)備著為人類生命科學(xué)研究而“獻(xiàn)身”。
圖5和圖6 長勢良好的RAW 264.7（小鼠單核巨噬細(xì)胞白血病細(xì)胞）
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