Fetuin A胎球蛋白A對(duì)人預(yù)脂肪細(xì)胞株分化的影響及作用機(jī)制
實(shí)驗(yàn)材料:
1. 人預(yù)脂肪細(xì)胞株3T3-L1
2. 重組人源Fetuin A蛋白
3. 細(xì)胞培養(yǎng)基DMEM及補(bǔ)充物
4. 實(shí)時(shí)熒光定量PCR相關(guān)試劑
5. Western blot相關(guān)試劑
6. 甘油三酯(TG)測(cè)定盒
7. 細(xì)胞因子檢測(cè)試劑盒
8. 特異性通路抑制劑
9. 其他常規(guī)細(xì)胞實(shí)驗(yàn)試劑
實(shí)驗(yàn)方法:
1. 3T3-L1細(xì)胞培養(yǎng)至70-80%融合,改用分化培養(yǎng)基,加入Fetuin A(50、200ng/ml)或同質(zhì)體;
2. 分化第1、3、5天,收集細(xì)胞檢測(cè)PPARγ和C/EBPα的mRNA及蛋白表達(dá)(PCR及Western blot);
3. 分化第7天,檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)TG含量及分泌的TNFα、IL-1β和IL-6;
4. 采用特異性抑制劑阻斷MAPK/PI3K通路,觀察Fetuin A的作用;
5. 采用siRNA敲低CSF-1R,檢測(cè)Fetuin A的作用。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果:
1. Fetuin A上調(diào)PPARγ和C/EBPα的表達(dá),增加TG積累,促進(jìn)3T3-L1細(xì)胞分化;
2. Fetuin A上調(diào)TNFα、IL-1β和IL-6的分泌;
3. MAPK/PI3K通路抑制劑可逆轉(zhuǎn)Fetuin A的上述作用;
4. 敲低CSF-1R也可減弱Fetuin A對(duì)3T3-L1細(xì)胞分化的促進(jìn)作用。實(shí)驗(yàn)結(jié)論:
Fetuin A可通過(guò)激活MAPK/PI3K通路、上調(diào)PPARγ和C/EBPα的表達(dá)、調(diào)控細(xì)胞因子的分泌等機(jī)制促進(jìn)3T3-L1細(xì)胞的分化。這些效應(yīng)可能涉及Fetuin A與CSF-1R的相互作用。本研究有助于揭示Fetuin A參與脂肪代謝調(diào)控的分子機(jī)理,為開(kāi)發(fā)治療代謝性疾病的新策略提供理論依據(jù)。
產(chǎn)品：Y07501 重組人胎球蛋白A Recombinant human Fetuin A
內(nèi)毒素：小于5EU/mg.
純度：SDS-PAGE檢測(cè)，純度大于95.0%。
規(guī)格：50ug/1g（工業(yè)客戶(hù) 100g和kg包裝）
介紹：
胎球蛋白A Fetuin A是一種人類(lèi)血漿糖蛋白，屬于蛋白酶抑制劑 Cystatin 家族。胎球蛋白A在胚胎細(xì)胞和成年肝細(xì)胞中高表達(dá)，在單核細(xì)胞/巨噬細(xì)胞中低表達(dá)。該蛋白具有半胱氨酸蛋白酶抑制劑樣結(jié)構(gòu)域、磷酸鈣結(jié)合位點(diǎn)和 TGF（轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子）-β 細(xì)胞因子結(jié)合基序。重組人胎球蛋白A 是一種含有282個(gè)氨基酸的A鏈和27個(gè)氨基酸的B鏈的異二聚體蛋白。由于糖基化，重組胎球蛋白A 在非還原條件下通過(guò) SDS-PAGE 遷移時(shí)的表觀分子量為 45-55kDa。
胎球蛋白A由真核細(xì)胞表達(dá)的重組蛋白，是將蛋白基因接入穩(wěn)定表達(dá)載體，轉(zhuǎn)化CHO細(xì)胞，經(jīng)克隆篩選，質(zhì)量驗(yàn)證，挑選的穩(wěn)定表達(dá)株，由化學(xué)成分確定的培養(yǎng)基（不含有任何動(dòng)物源成分）發(fā)酵制備，工藝穩(wěn)定，保證了產(chǎn)品質(zhì)量及批次間的一致性。
生化/生理作用：
AHSG (α-2-HS-糖蛋白，也稱(chēng)為胎球蛋白-A)是主要的血清蛋白成分，可發(fā)揮多種鈣依賴(lài)性生理活性，并可介導(dǎo)某些腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)信號(hào)。它還可以作為天然抗特定 TGF-β（轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子 β）和 BMP(骨形態(tài)發(fā)生蛋白)信號(hào)蛋白的拮抗劑。血清中胎球蛋白 A 的高水平與輕度成骨不全有關(guān)。另外，在佩吉特氏病中觀察到它的水平下降。它被預(yù)測(cè)為下咽鱗狀細(xì)胞癌早期診斷的潛在生物標(biāo)志物。
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