ELISA實驗基質(zhì)效應(yīng)評估方法總結(jié)

在ELISA實驗的時候，我們經(jīng)常會遇到樣品濃度挨近試劑盒的靈敏度，容易發(fā)生樣本OD450值低于空白值的現(xiàn)象，特別是在血清和血漿樣本中。這就有可能是基質(zhì)效應(yīng)導(dǎo)致的結(jié)果。

基質(zhì)效應(yīng)定義：

首先我們要知道什么是基質(zhì)，基質(zhì)是指樣品中目標(biāo)分析物以外的部分。由于基質(zhì)成分會對分析過程有顯著干擾，影響分析結(jié)果的準(zhǔn)確性。業(yè)內(nèi)把這些影響統(tǒng)稱為基質(zhì)效應(yīng)。這是ELISA試劑盒開發(fā)和使用中需要避開的雷。

基質(zhì)效應(yīng)判斷：

當(dāng)單個樣本或少量樣本值低于空白值時，可能是實驗操作出現(xiàn)問題，這時應(yīng)增加重復(fù)，進(jìn)步操作技術(shù)。當(dāng)許多樣本都低于空白值時，應(yīng)思考基質(zhì)效應(yīng)的影響，建立校正曲線予以修改�；�質(zhì)效應(yīng)的原因錯綜復(fù)雜，有可能是樣品中存在的基質(zhì)導(dǎo)致原抗體的聯(lián)絡(luò)結(jié)合能力下降，便產(chǎn)生了樣本值低于空白值的現(xiàn)象。導(dǎo)致樣本值無法計算出數(shù)值，或許數(shù)值為負(fù)。

雖然原因復(fù)雜，但有方法可以用來評估基質(zhì)效應(yīng)。

種方法是采用線性稀釋，一般來講，抗原和捕獲抗體、檢測抗體之間的結(jié)合作用很強(qiáng)，樣品濃度被稀釋并不影響它們的結(jié)合，而造成基質(zhì)效應(yīng)的非特異結(jié)合的力要弱很多，如果不斷稀釋樣品，非特異結(jié)合造成的干擾會逐步減少，測量值也更接近真實值。沒有基質(zhì)效應(yīng)時，無論如何稀釋，測量值都和真實值吻合。而有基質(zhì)效應(yīng)時，稀釋會造成非特異性結(jié)合比例的減少，測量值也相應(yīng)地產(chǎn)生很大改變。

第二種方法是摻入回收率實驗，將低、中和高濃度的分析物摻入到已測定過濃度的樣本中，摻入前后實測到的濃度增加部分與摻入濃度之比就是回收率，回收率以百分比的形式呈現(xiàn)�；厥章式橛�80-120%，才符合標(biāo)準(zhǔn)。

ELISA實驗中基質(zhì)效應(yīng)避免：

1、基質(zhì)凈化法

植物性基質(zhì)主要雜質(zhì)：色素、酸類、糖類，常用GCB/NH2、GCB/PSA、Si、C18 SPE 方式和QuEChERS方式除雜。

動物性基質(zhì)主要雜質(zhì)：脂肪、蛋白質(zhì)，常用C18、HLB、Si、離子交換 SPE方式除雜。

2、直接稀釋法

優(yōu)點：
直接稀釋法通過有機(jī)溶劑稀釋樣品基質(zhì)萃取液的濃度，即減少待測溶液中雜質(zhì)含量。

缺點：
會犧牲檢出限。

3、加入內(nèi)標(biāo)物或同位素內(nèi)標(biāo)物法

優(yōu)點：
加入內(nèi)標(biāo)物或同位素內(nèi)標(biāo)物參與前處理過程可以有效補(bǔ)償目標(biāo)農(nóng)藥的折損，還可以有效地消除因進(jìn)樣不充分或儀器響應(yīng)不穩(wěn)定造成的結(jié)果差異。

缺點：
內(nèi)標(biāo)物在一定程度上受基質(zhì)效應(yīng)的影響，且其價格昂貴、市場供應(yīng)不足。

4、加入分析保護(hù)劑法

優(yōu)點：
試驗證明，保護(hù)劑可以有效改善敏感農(nóng)藥的響應(yīng)、峰形和方法的穩(wěn)定性。

缺點：
分析保護(hù)劑的添加對某些農(nóng)藥的分析也失去作用。

5、基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)溶液校正法

優(yōu)點：
基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)溶液校正法是當(dāng)今國際上公認(rèn)一種有效補(bǔ)償基質(zhì)增強(qiáng)效應(yīng)和基質(zhì)減弱效應(yīng)的方法。

缺點：
工作量大；獲取不含目標(biāo)區(qū)的空白基質(zhì)難度大。

6、優(yōu)化儀器條件

每種方法均有優(yōu)缺點，具體可根據(jù)實際情況選擇兼顧準(zhǔn)確、經(jīng)濟(jì)、高效的一種或多種方法。