大小鼠Von Frey測痛實驗方法全面解析：操作技巧與注意事項

Von Frey，也被稱為纖毛機械刺激針，它通過在皮膚上施加細絲刺激來評估觸覺敏感性。這種測試方法常被用作衡量外周和/或中樞敏化狀態(tài)下異常疼痛的替代指標，在疼痛研究領(lǐng)域廣泛應(yīng)用于各種動物模型。

嚙齒動物的臨床前模型對于探索病理生理機制以及尋找新型鎮(zhèn)痛藥物而言，具有不可估量的價值。然而，嚙齒動物的疼痛評估往往充滿挑戰(zhàn)。通常，它們對機械或熱刺激的反應(yīng)變化，被用作衡量疼痛敏感性的行為指標。

在Von Frey測試中，我們會對嚙齒動物身體的特定部位施加點狀刺激，并記錄下引發(fā)其撤回反射所需的刺激強度。這一過程通常借助具有特定彎曲力的校準光纖來實現(xiàn)。機械敏感性測試則涉及到使用細校準的塑料絲對后爪足底表面施加刺激。機械撤回閾值被定義為能夠引發(fā)撤回反射的最小規(guī)格細絲，目的在于測量機械傷害感受，以評估動物檢測有害刺激的能力。一旦這種反應(yīng)發(fā)生，所需的壓力會以克為單位進行記錄，這個值被視為個體的閾值。目前，已有電子測痛儀問世，它能夠連續(xù)施加力度，并提供連續(xù)尺度的腳爪撤退閾值。

一、實驗操作流程

步驟a：將小鼠放入高架線柵的測試室內(nèi)。
步驟b：讓每只小鼠在測試室內(nèi)靜置一個小時，以便它們適應(yīng)環(huán)境。
步驟c：將小鼠放置在寬規(guī)格的金屬絲網(wǎng)表面上，首先測試其左后爪。通過從網(wǎng)的下側(cè)將Von Frey細絲施加到小鼠后爪的足底表面來進行測試。當(dāng)刺激達到閾值時，小鼠會通過彈開爪子來作出反應(yīng)。起始測試時，我們采用0.6g的Von Frey細絲。將細絲輕輕按壓在后爪的足底表面，施加足夠的力使細絲彎曲，并保持接觸1-2秒。根據(jù)對前一個細絲的反應(yīng)，我們將選擇下一個細絲的尺寸。如果沒有觀察到撤回反應(yīng)，則選用更高一級的細絲；若出現(xiàn)撤回反應(yīng)，則選用更低一級的細絲。通過不斷增加不同硬度的Von Frey細絲規(guī)格，并重復(fù)此過程，直至刺激引發(fā)后爪縮回或舔舐行為。我們將持續(xù)施加細絲，直至對同一只爪子進行五次測試，每次測試之間至少間隔2分鐘。
步驟d：隨后，用相同的方法對右后爪進行測試。

二、測試階段

測試1：在適應(yīng)環(huán)境后的24小時，使用與適應(yīng)期相同的程序，再次使用Von Frey細絲對小鼠進行測試。
測試2：在適應(yīng)環(huán)境后的48小時，再次按照適應(yīng)期的程序，使用Von Frey細絲對小鼠進行測試。

在整個實驗過程中，我們將多次重復(fù)測試，并詳細記錄每次測試的結(jié)果。此外，我們還將檢測動物的縮爪潛伏期，即在藥物注射前（給藥前）和注射后，分別測量同一只動物的同側(cè)（結(jié)扎側(cè)）和對側(cè)（未結(jié)扎側(cè)）爪子的撤回閾值。最終的結(jié)果將以ΔPWT（克）的形式表示，即對側(cè)潛伏期減去同側(cè)潛伏期。