DNA Marker-核酸分子標簽原理解析

DNA Marker（DNA標記物）是一種用于核酸電泳的分子量標準工具，通過已知長度的DNA片段幫助研究人員估計樣品DNA的大小、濃度及電泳遷移特性。以下是其核心信息： 一、定義與作用

1. ​基本定義
   DNA Marker由特定分子量的雙鏈DNA片段組成（如100bp、500bp、1kb等），混合含染料的上樣緩沖液，用于電泳中作為分子量參照。
   • ​廣義：包括可遺傳的DNA序列或蛋白質標記。
   • ​狹義：特指反映基因組差異的特異性DNA片段。
2. ​核心作用
   • ​分子量估算：通過對比Marker條帶與樣品條帶的位置，粗略判斷目標DNA的大小。
   • ​濃度檢測：利用Marker中高濃度條帶（如750bp）的亮度，輔助估算樣品濃度。
   • ​電泳條件優(yōu)化：根據目標片段大小選擇凝膠濃度（如大片段用低濃度瓊脂糖，小片段用高濃度）。

二、類型與規(guī)格

1. ​常見類型
   • ​預染Marker：含RedView、SYBR Green等染料，可直接電泳觀察。
   • ​非預染Marker：需后續(xù)染色，靈敏度更高。
   • ​梯度Marker：覆蓋廣泛分子量范圍（如1000bp、2000bp），適合多目標分析。
2. ​規(guī)格示例
   • ​1000bp：含50bp、100bp至1000bp的條帶，適用于常規(guī)PCR產物分析。
   • ​12000bp：覆蓋12000bp以上大分子DNA，用于質粒完整性檢測。

三、選擇標準

1. ​目標片段匹配
   • 選擇Marker中與目標片段大小相鄰的密集條帶，以提高估算精度。
   • 例如：檢測500bp片段時，優(yōu)先選擇含400bp、600bp條帶的Marker。
2. ​凝膠濃度適配
   • 大片段（>1kb）：使用0.8%-1.0%瓊脂糖+1xTAE緩沖液。
   • 小片段（<500bp）：使用1.5%-2.0%瓊脂糖+0.5xTBE緩沖液。
3. ​染料類型
   • ​RedView：低毒性，可直接紫外觀察，適合常規(guī)實驗。
   • ​SYBR Green I：靈敏度高，但穩(wěn)定性較差，需避免長時間電泳。

四、應用場景

1. ​分子生物學實驗
   • PCR產物分析、質粒構建驗證。
   • 基因組DNA提取質量檢測。
2. ​醫(yī)學與臨床檢測
   • 病原體核酸檢測（如新冠病毒）中評估擴增效率。
   • 遺傳病篩查中檢測基因突變。
3. ​工業(yè)與科研
   • 基因組作圖、物種親緣關系分析。
   • 腫瘤標志物檢測中的基因表達分析。

五、使用注意事項

1. ​保存條件
   • 常規(guī)Marker（含Loading Buffer）：室溫可穩(wěn)定3個月，長期保存需-20℃。
   • 預染Marker：避免反復凍融，建議分裝后使用。
2. ​常見問題解決
   • ​條帶模糊：檢查DNA降解或電泳電壓過高。
   • ​遷移異常：確認樣品是否含高鹽或蛋白污染，調整電泳條件。
   • ​Marker丟失：縮短電泳時間（如溴酚藍遷移至凝膠2/3處停止）。

六、市場代表產品

• ​達原辰光DNA Marker：覆蓋50bp-12000bp，條帶清晰，適合各種應用。
• ​諾唯贊DL2000：覆蓋100bp-2000bp，適合常規(guī)PCR