對蝦桃拉綜合癥病毒（TSV）核酸檢測試劑盒（一管式PCR-熒光探針法）使用說明
對蝦桃拉綜合癥病毒（TSV）核酸檢測試劑盒（一管式PCR-熒光探針法）
◆ 產(chǎn)品說明
動物病害檢測系列可針對食品、動物組織等樣品中病原的特異核酸片段進行擴增，通過實時擴增曲線判定結(jié)果。本產(chǎn)品用于對對蝦桃拉綜合癥病毒（TSV）的檢測，檢出限為103copies/μL基因組DNA。
- 產(chǎn)品組成（96測試）
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031022 LⅡ | |
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試劑 |
含量 |
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A-TSV-P |
20μL × 8管× 12排 |
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NG-P |
100μL × 3支 |
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PG-TSV-P |
100μL × 2支 |
- 適用儀器
ABI 7500、CFX 96、Mx 3005P、LineGene9600等實時熒光PCR儀。
◆ 自備耗材和儀器
①冰盒；②移液器（0.5-10μL，10-100μL，100-1000μL）及配套滅菌吸頭；③離心機；④渦旋混勻器；⑤金屬��；⑥均質(zhì)機、攪拌機或研缽等研磨器具；⑦電子天平。
◆ 注意事項
1．本試劑檢測靈敏度高。為了防止污染，實驗要分區(qū)操作。
1）第一區(qū)：樣本制備區(qū)。
2）第二區(qū)：模板添加區(qū)。
3）第三區(qū)：擴增及產(chǎn)物分析區(qū)。
★ 分區(qū)之間最好進行物理性隔離，避免人為因素造成的污染。
2．實驗過程中穿戴工作服和乳膠手套，不同區(qū)域獨立使用工具，需更換手套和實驗服。
3．嚴格按照操作步驟操作，試劑配制和加樣等步驟請嚴格按照說明書要求在冰盒上操作。
4．反應液中的成分對光敏感，應避光保存。試劑使用前要完全解凍，但應避免反復凍融，推薦使用前離心30秒，并按檢測頻次將反應液以適當體積分管保存。
5．反應結(jié)束后，擴增管請置于密封袋內(nèi)丟棄，當日清理，開蓋易造成氣溶膠污染，禁止開蓋。
6．不同批號試劑請勿混合使用，在有效期內(nèi)使用。
◆ 樣品處理
參照《SN/T1151.1-2011對蝦桃拉綜合征檢疫技術(shù)規(guī)范》或其他標準處理樣品，制備的樣本保存待用。
詳細步驟請按照標準操作或查閱食安通軟件。
- 實驗操作
1.模板制備（樣本制備區(qū)）
建議使用配套水生動物病毒基因組DNA/RNA提取試劑盒系列產(chǎn)品，具體過程詳見產(chǎn)品說明書。
2.添加模板（模板添加區(qū)，放置于冰盒上進行）
剪下所需測試數(shù)的已含有反應液的PCR管，放置在室溫待解凍后，離心30秒后揭開封口膜，向每管反應液中分別加入5μL模板，順序為NG、待測樣品模板、PG-TSV-P。蓋好配套的PCR管蓋后，渦旋混勻30s，離心1min，立即進行PCR擴增反應。
3. 擴增反應（擴增及產(chǎn)物分析區(qū)）
使用熒光定量PCR儀，熒光基團選擇FAM，淬滅基團選擇TAMRA。
按下列條件設(shè)置擴增反應：
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PCR循環(huán) |
熒光收集位點 | ||
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48℃ |
30分鐘 |
1個循環(huán) |
— |
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95℃ |
10分鐘 |
1個循環(huán) |
— |
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95℃ |
15秒 |
40個循環(huán) |
— |
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60℃ |
1分鐘 |
※ | |
其他儀器請參照儀器說明書進行設(shè)置。
- 結(jié)果判定
檢測樣品無Ct值，曲線為直線或輕微斜線，無“S”型擴增曲線，可報告樣品陰性，不含有對蝦桃拉綜合癥病毒（TSV）或含量低于檢出限；
檢測樣品Ct≤38，曲線呈“S”型擴增曲線，可直接報告樣品陽性，含有對蝦桃拉綜合癥病毒（TSV）；
檢測樣品38<Ct≤40，需進行一次重復實驗，若Ct值仍處于38和40之間且呈“S”型擴增曲線，同時陰性對照無Ct值，報告樣品陽性，否則報告樣品陰性。
- NG反應為平滑直線，PG反應為“S”型擴增曲線，此次檢測結(jié)果有效，否則無效。如重復檢測結(jié)果仍為無效，請與技術(shù)支持人員聯(lián)系。
