RAW264.7細(xì)胞避免分化的方法及培養(yǎng)的注意事項(xiàng)總結(jié)
RAW264.7細(xì)胞作為一種經(jīng)典的小鼠巨噬細(xì)胞系，因其易于培養(yǎng)和操作而成為科研工作者的得力助手。然而，RAW264.7細(xì)胞在培養(yǎng)過程中容易發(fā)生分化，導(dǎo)致細(xì)胞形態(tài)改變、功能下降，甚至影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性。如何讓RAW264.7細(xì)胞“長得更漂亮”，保持其原始的形態(tài)和功能？今天，我們將為您揭秘RAW264.7細(xì)胞培養(yǎng)的黃金法則，助您輕松駕馭這一細(xì)胞系！
細(xì)胞信息
l 倍增時(shí)間：11-30 hours，（生長快速，消耗營養(yǎng)快速，T25瓶建議添加7ml完全培養(yǎng)基，次日進(jìn)行觀察生長速度）。
l 傳代比例：1:4-6
l 培養(yǎng)體系：DMEM高糖（品牌：中喬新舟 貨號(hào)：ZQ-100）+10%胎牛血清（中喬新舟 貨號(hào)：ZQ0500）+1%雙抗（中喬新舟 貨號(hào)：CSP006）
l 細(xì)胞形態(tài)：該株巨噬細(xì)胞形態(tài)上包含松散貼壁的紡錘形和圓形或者立方形的細(xì)胞。當(dāng)細(xì)胞密度較大時(shí)，細(xì)胞會(huì)輕微脫落變圓或者許多細(xì)胞堆在一起，有些細(xì)胞甚至脫落漂浮，這些漂浮的細(xì)胞是活的，在傳代時(shí)應(yīng)收集起來離心，細(xì)胞沉淀可以繼續(xù)培養(yǎng)。
l 換液頻率：2~3次/周
正確傳代方法一
正確的傳代方法是 RAW 264.7 細(xì)胞培養(yǎng)的關(guān)鍵，每一步操作都要細(xì)致入微，稍有不慎細(xì)胞就分化了。RAW 264.7 細(xì)胞不能用胰酶消化，胰酶消化傳代反而更容易分化。我司培養(yǎng) RAW 264.7 細(xì)胞是十余年，摸索出一個(gè)刮刀傳代的方法，此方法操作簡單，能更好地控制細(xì)胞分化率。為了更加直觀學(xué)習(xí)傳代步驟，我們用視頻進(jìn)行講解，方便大家更好把控傳代步驟：
正確傳代方法二
當(dāng)您沒有準(zhǔn)備刮刀時(shí)，我司建議您按照以下操作步驟進(jìn)行傳代，減少細(xì)胞的分化。
l 細(xì)胞密度達(dá)到80%。用手掌心拍打瓶尾部，觀察細(xì)胞脫落情況。
l 拍打過程中有50-80%的細(xì)胞會(huì)脫落。此時(shí)收集脫落細(xì)胞。
l 按照1：4-6的比例傳代，并補(bǔ)充新鮮完全培養(yǎng)基。T25瓶7ml完全培養(yǎng)基。
l （切記用槍頭吹打或巴氏吸管吹打，由于每個(gè)人吹打力度不同，吹打次數(shù)不同，傳代3-5次后會(huì)造成很多不可控因素導(dǎo)致細(xì)胞分化）。
l 以下是我司客戶拍打傳代圖：
T25培養(yǎng)瓶活細(xì)胞RAW264.7到貨培養(yǎng)須知：
l 放入培養(yǎng)箱靜止2-4h后觀察細(xì)胞貼壁情況，并進(jìn)行拍照。
l 若少量漂浮細(xì)胞，需要離心1200轉(zhuǎn)5分鐘收集細(xì)胞，貼壁細(xì)胞根據(jù)視頻步驟進(jìn)行傳代處理，無刮刀根據(jù)“方法二”進(jìn)行處理。
l 若對(duì)傳代密度把控不了和操作步驟還是不了解，可當(dāng)天聯(lián)系我司銷售人員/區(qū)域代理或者我司技術(shù)人員。
培養(yǎng)注意事項(xiàng)
l 該細(xì)胞傳代時(shí)不需要用胰酶消化。傳代時(shí)，用無菌細(xì)胞刮刮拭培養(yǎng)表面將細(xì)胞刮落，收集離心后重懸接種到新的培養(yǎng)瓶中。
l 該細(xì)胞形態(tài)上包含松散貼壁的紡錘形和圓形或者立方形。當(dāng)細(xì)胞密度較大時(shí)，細(xì)胞會(huì)輕微脫落變圓或者許多細(xì)胞堆積在一起，有些細(xì)胞甚至脫落漂浮。這些漂浮的細(xì)胞是存活的，在傳代時(shí)應(yīng)收集起來，離心后細(xì)胞沉淀可以繼續(xù)培養(yǎng)。細(xì)胞生長密度越大時(shí)，巨噬細(xì)胞（圓細(xì)胞）就會(huì)越多。
l 細(xì)胞對(duì)血清質(zhì)量非常敏感，可能引起細(xì)胞貼壁能力變化或者細(xì)胞分化，應(yīng)選用高質(zhì)量的胎牛血清。
l 培養(yǎng)條件、運(yùn)輸、環(huán)境變化等因素會(huì)影響此細(xì)胞的狀態(tài)，因此收到細(xì)胞后需要調(diào)整一段時(shí)間，請(qǐng)耐心培養(yǎng)。
l 強(qiáng)烈推薦使用本公司對(duì)應(yīng)的培養(yǎng)基，減少細(xì)胞培養(yǎng)過程的變因。
一、 RAW264.7凍存管復(fù)蘇步驟：
l 從液氮中取出凍存的raw26.4細(xì)胞，迅速放入37℃水浴中解凍。(或用干冰盒轉(zhuǎn)移到實(shí)驗(yàn)室)
l 將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至含預(yù)溫培養(yǎng)基的離心管中，輕輕混勻。(15ML離心管3ml)
l 以1000 rpm離心5分鐘，棄上清，用新鮮培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。（T25添加7ml）
l 將細(xì)胞接種于培養(yǎng)皿中，置于37℃、5% CO₂的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
l 以下圖片是我司客戶收到凍存管復(fù)蘇24h后狀態(tài)圖。
細(xì)胞信息
l 倍增時(shí)間：11-30 hours，（生長快速，消耗營養(yǎng)快速，T25瓶建議添加7ml完全培養(yǎng)基，次日進(jìn)行觀察生長速度）。
l 傳代比例：1:4-6
l 培養(yǎng)體系：DMEM高糖（品牌：中喬新舟 貨號(hào)：ZQ-100）+10%胎牛血清（中喬新舟 貨號(hào)：ZQ0500）+1%雙抗（中喬新舟 貨號(hào)：CSP006）
l 細(xì)胞形態(tài)：該株巨噬細(xì)胞形態(tài)上包含松散貼壁的紡錘形和圓形或者立方形的細(xì)胞。當(dāng)細(xì)胞密度較大時(shí)，細(xì)胞會(huì)輕微脫落變圓或者許多細(xì)胞堆在一起，有些細(xì)胞甚至脫落漂浮，這些漂浮的細(xì)胞是活的，在傳代時(shí)應(yīng)收集起來離心，細(xì)胞沉淀可以繼續(xù)培養(yǎng)。
l 換液頻率：2~3次/周
正確傳代方法一
正確的傳代方法是 RAW 264.7 細(xì)胞培養(yǎng)的關(guān)鍵，每一步操作都要細(xì)致入微，稍有不慎細(xì)胞就分化了。RAW 264.7 細(xì)胞不能用胰酶消化，胰酶消化傳代反而更容易分化。我司培養(yǎng) RAW 264.7 細(xì)胞是十余年，摸索出一個(gè)刮刀傳代的方法，此方法操作簡單，能更好地控制細(xì)胞分化率。為了更加直觀學(xué)習(xí)傳代步驟，我們用視頻進(jìn)行講解，方便大家更好把控傳代步驟：
正確傳代方法二
當(dāng)您沒有準(zhǔn)備刮刀時(shí)，我司建議您按照以下操作步驟進(jìn)行傳代，減少細(xì)胞的分化。
l 細(xì)胞密度達(dá)到80%。用手掌心拍打瓶尾部，觀察細(xì)胞脫落情況。
l 拍打過程中有50-80%的細(xì)胞會(huì)脫落。此時(shí)收集脫落細(xì)胞。
l 按照1：4-6的比例傳代，并補(bǔ)充新鮮完全培養(yǎng)基。T25瓶7ml完全培養(yǎng)基。
l （切記用槍頭吹打或巴氏吸管吹打，由于每個(gè)人吹打力度不同，吹打次數(shù)不同，傳代3-5次后會(huì)造成很多不可控因素導(dǎo)致細(xì)胞分化）。
l 以下是我司客戶拍打傳代圖：
（客戶按照1：4-6比例傳代，第二天提供20X細(xì)胞狀態(tài)圖。
T25培養(yǎng)瓶活細(xì)胞RAW264.7到貨培養(yǎng)須知：
l 放入培養(yǎng)箱靜止2-4h后觀察細(xì)胞貼壁情況，并進(jìn)行拍照。
l 若少量漂浮細(xì)胞，需要離心1200轉(zhuǎn)5分鐘收集細(xì)胞，貼壁細(xì)胞根據(jù)視頻步驟進(jìn)行傳代處理，無刮刀根據(jù)“方法二”進(jìn)行處理。
l 若對(duì)傳代密度把控不了和操作步驟還是不了解，可當(dāng)天聯(lián)系我司銷售人員/區(qū)域代理或者我司技術(shù)人員。
培養(yǎng)注意事項(xiàng)
l 該細(xì)胞傳代時(shí)不需要用胰酶消化。傳代時(shí)，用無菌細(xì)胞刮刮拭培養(yǎng)表面將細(xì)胞刮落，收集離心后重懸接種到新的培養(yǎng)瓶中。
l 該細(xì)胞形態(tài)上包含松散貼壁的紡錘形和圓形或者立方形。當(dāng)細(xì)胞密度較大時(shí)，細(xì)胞會(huì)輕微脫落變圓或者許多細(xì)胞堆積在一起，有些細(xì)胞甚至脫落漂浮。這些漂浮的細(xì)胞是存活的，在傳代時(shí)應(yīng)收集起來，離心后細(xì)胞沉淀可以繼續(xù)培養(yǎng)。細(xì)胞生長密度越大時(shí)，巨噬細(xì)胞（圓細(xì)胞）就會(huì)越多。
l 細(xì)胞對(duì)血清質(zhì)量非常敏感，可能引起細(xì)胞貼壁能力變化或者細(xì)胞分化，應(yīng)選用高質(zhì)量的胎牛血清。
l 培養(yǎng)條件、運(yùn)輸、環(huán)境變化等因素會(huì)影響此細(xì)胞的狀態(tài)，因此收到細(xì)胞后需要調(diào)整一段時(shí)間，請(qǐng)耐心培養(yǎng)。
l 強(qiáng)烈推薦使用本公司對(duì)應(yīng)的培養(yǎng)基，減少細(xì)胞培養(yǎng)過程的變因。
一、 RAW264.7凍存管復(fù)蘇步驟：
l 從液氮中取出凍存的raw26.4細(xì)胞，迅速放入37℃水浴中解凍。(或用干冰盒轉(zhuǎn)移到實(shí)驗(yàn)室)
l 將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至含預(yù)溫培養(yǎng)基的離心管中，輕輕混勻。(15ML離心管3ml)
l 以1000 rpm離心5分鐘，棄上清，用新鮮培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。（T25添加7ml）
l 將細(xì)胞接種于培養(yǎng)皿中，置于37℃、5% CO₂的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
l 以下圖片是我司客戶收到凍存管復(fù)蘇24h后狀態(tài)圖。
復(fù)蘇24h后raw264.7細(xì)胞圖,中喬新舟客戶提供，可進(jìn)行傳代。
復(fù)蘇24h后raw264.7細(xì)胞圖,中喬新舟客戶提供手機(jī)拍攝，可進(jìn)行傳代。
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