快速集成總膳食纖維檢測(cè)試劑盒使用說(shuō)明書
快速全組分總膳食纖維檢測(cè)程序（包括抗性淀粉和不可消化的寡糖）K-RINTDF （100次/盒）
AOAC方法2017.16 國(guó)際谷物科技協(xié)會(huì)標(biāo)準(zhǔn)草案185
AOAC方法2017.16 國(guó)際谷物科技協(xié)會(huì)標(biāo)準(zhǔn)草案185
產(chǎn)品簡(jiǎn)介：
國(guó)際食品法典委員會(huì)（CAC）于 2009 年 6 月 1通過(guò)的膳食纖維定義包括不會(huì)被人類小腸中的內(nèi)源酶水解的碳水化合物聚合物，因此也包括抗性淀粉（RS）。
這一定義還包括聚合度為 3~9 的寡糖，但是否將這些寡糖納入膳食纖維測(cè)定值由每個(gè)國(guó)家當(dāng)局決定。
2007 年發(fā)布了一種為支持國(guó)際食品法典委員會(huì)定義而設(shè)計(jì)的方法 2，成功通過(guò)實(shí)驗(yàn)室間評(píng)估 3,4，并獲得美國(guó)官定分析化學(xué)家協(xié)會(huì)（AOAC）批準(zhǔn)（方法編號(hào)為 2009.01；2011.25）3-5。AOAC 方法 2009.01 可測(cè)定總膳食纖維，所測(cè)膳食纖維類型包括高分子量膳食纖維（HMWDF）（不溶性膳食纖維（IDF）和不溶于78%乙醇溶液的、可沉淀的可溶性膳食纖維（SDFP））與可溶于 78%乙醇溶液的、不可沉淀的可溶性膳食纖維（SDFS）。在過(guò)去 8 年里，這一方法被廣泛應(yīng)用于食品和原料檢測(cè)，并揭示了其面臨的諸多挑戰(zhàn)/問(wèn)題：
a) 胰 α-淀粉酶+淀粉葡萄糖苷酶（PAA+AMG）孵育時(shí)間長(zhǎng)達(dá) 16 小時(shí)（與用于測(cè)定抗性淀粉的 AOAC 方法 2002.02 的孵育條件一致））4,6，沒(méi)有生理學(xué)依據(jù)。食物在小腸中的停留時(shí)間一般只有 3 至 5 小時(shí) 7-9。
b) 市面上出售的大多數(shù)低聚果糖（FOS）中都含有菊三糖（果糖基-β-（2-1）-果糖基-β-（2-1）-果糖），其會(huì)隨二糖組分一起被洗脫，無(wú)法被 WatersSugar-Pak®高效液相色譜柱測(cè)定為膳食纖維。
c) 在 AOAC 方法 2009.01 的孵育條件下，非抗性淀粉水解時(shí)會(huì)有抗性麥芽糊精生成，被誤測(cè)為膳食纖維 8,10,11。
d) PAA/AMG 孵育時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，造成樣品過(guò)度水解，導(dǎo)致磷酸酯交聯(lián)淀粉（RS4，例Fibersym®）12測(cè)定結(jié)果低于實(shí)際值。
e) 出于對(duì)檢測(cè)人員健康的考慮，不宜使用防腐劑疊氮化鈉。
在下圖（圖 1）介紹的“快速”全組分總膳食纖維檢測(cè)（RINTDF）流程中，AOAC 方法 2009.01 和 2011.25 面臨的各項(xiàng)挑戰(zhàn)和局限性都已得到解決 8。使用更高濃度的 PAA 和 AMG 進(jìn)行孵育可防止抗性麥芽糊精的生成（圖 2）�？s短孵育時(shí)間，與生理?xiàng)l件一致，可提高 Fibersym®（RS4）和 Hylon VII®（高直鏈玉米淀粉）的膳食纖維測(cè)定值（表 1）。用 TOSOH TSKgel®G2500PWXL 凝膠滲透色譜柱 13替換 Waters Sugar-Pak®色譜柱解決了 F3 色譜分析的問(wèn)題（圖 3）�？s短孵育時(shí)間后，無(wú)需在孵育緩沖液中添加疊氮化鈉。此外，RINTDF 使用更高濃度的 PAA 和 AMG 進(jìn)行孵育，除低聚異麥芽糖之外，所有不可消化的寡糖的 SDFS 測(cè)定值與 AOAC 方法 2009.01 測(cè)得的結(jié)果相同（表 2）。用試管中的樹脂對(duì)樣品中的大部分鹽分進(jìn)行脫鹽處理，然后使用 Bio-Rad 的 HPLC 去離子預(yù)柱實(shí)現(xiàn)完全去離子，HPLC 的樣品制備也得以簡(jiǎn)化。
在下圖（圖 1）介紹的“快速”全組分總膳食纖維檢測(cè)（RINTDF）流程中，AOAC 方法 2009.01 和 2011.25 面臨的各項(xiàng)挑戰(zhàn)和局限性都已得到解決 8。使用更高濃度的 PAA 和 AMG 進(jìn)行孵育可防止抗性麥芽糊精的生成（圖 2）�？s短孵育時(shí)間，與生理?xiàng)l件一致，可提高 Fibersym®（RS4）和 Hylon VII®（高直鏈玉米淀粉）的膳食纖維測(cè)定值（表 1）。用 TOSOH TSKgel®G2500PWXL 凝膠滲透色譜柱 13替換 Waters Sugar-Pak®色譜柱解決了 F3 色譜分析的問(wèn)題（圖 3）�？s短孵育時(shí)間后，無(wú)需在孵育緩沖液中添加疊氮化鈉。此外，RINTDF 使用更高濃度的 PAA 和 AMG 進(jìn)行孵育，除低聚異麥芽糖之外，所有不可消化的寡糖的 SDFS 測(cè)定值與 AOAC 方法 2009.01 測(cè)得的結(jié)果相同（表 2）。用試管中的樹脂對(duì)樣品中的大部分鹽分進(jìn)行脫鹽處理，然后使用 Bio-Rad 的 HPLC 去離子預(yù)柱實(shí)現(xiàn)完全去離子，HPLC 的樣品制備也得以簡(jiǎn)化。
圖 1：AOAC 方法 2009.01 和 2017.16 的總膳食纖維檢測(cè)流程。
圖 2：根據(jù) AOAC 方法 2009.01 和 2017.16 進(jìn)行孵育后的“Uncle Ben’s ReadyRice”中的SDFS 組分在 TSKgel® G2500PWXL色譜柱上生成的高效液相色譜圖。
圖 2：根據(jù) AOAC 方法 2009.01 和 2017.16 進(jìn)行孵育后的“Uncle Ben’s ReadyRice”中的SDFS 組分在 TSKgel® G2500PWXL色譜柱上生成的高效液相色譜圖。請(qǐng)注意，根據(jù) AOAC 方法 2009.01 進(jìn)行孵育后的 SDFS 中存在七糖，而根據(jù)AOAC 方法 2017.16 進(jìn)行孵育后的 SDFS 中不存在七糖。
表 1：比較使用 AOAC 方法 2009.01（全組分總膳食纖維檢測(cè)程序）和 AOAC方法 2017.16（RINTDF 檢測(cè)程序）檢測(cè)一系列樣品測(cè)得的總膳食纖維值。
表 2：原始樣品以及依照 AOAC 方法 2009.01 和 AOAC 方法 2017.16（RINTDF檢測(cè)程序）進(jìn)行孵育后的樣品中的 DP≥3 的寡糖回收率。
*一種菊粉三糖含量較高的 Raftilose P-95 樣品。
表 2：原始樣品以及依照 AOAC 方法 2009.01 和 AOAC 方法 2017.16（RINTDF檢測(cè)程序）進(jìn)行孵育后的樣品中的 DP≥3 的寡糖回收率。
*一種菊粉三糖含量較高的 Raftilose P-95 樣品。
圖 3：依照 RINTDF 程序?qū)?200mg Raftilose P-95 和 100mg 丙三醇進(jìn)行孵育后所得 SDFS 組分在 TSKgel® G2500PWXL色譜柱上生成的 HPLC 色譜圖。
A. 原理：
A. 原理：
本手冊(cè)介紹了一種用于測(cè)定所有食品和食品原料中總膳食纖維（包括 DP≥3 的抗性淀粉SDFP（即不可消化的寡糖））的快速全組分檢測(cè)程序（RINTDF）。RINTDF 結(jié)合了 AOAC 官方方法2002.02、985.29、991.43、2001.03 和 2009.01的關(guān)鍵屬性。將兩份檢樣分別置于 250mL 密封瓶中，在胰 α-淀粉酶（PAA）和淀粉葡萄糖苷酶（AMG）的作用下，37°C 下攪拌或振蕩孵育 4 個(gè)小時(shí)（圖 4 和圖 5，第 19 頁(yè)）。在這一步驟中，非抗性淀粉被溶解并水解成 D-葡萄糖和痕量的麥芽糖。將 pH 值調(diào)節(jié)至 8.2（AMG 無(wú)活性），然后將孵育混合物加熱至 95℃左右，使 AMG 和 PAA 失活，從而終止反應(yīng)。樣品中的蛋白質(zhì)變性，并被蛋白酶水解。特定膳食纖維組分的測(cè)定方法如下：
i. 總高分子量膳食纖維（HMWDF）和 SDFS 的測(cè)定向孵育混合物中加入 4 倍體積的 95%乙醇并攪拌，孵育混合物中的 SDFP 形成沉淀，然后對(duì)懸浮液進(jìn)行過(guò)濾。將在坩堝中回收的 HMWDF（由不溶性膳食纖維（IDF）和 SDFP 組成）洗滌、干燥并稱重。用蛋白質(zhì)、灰分和空白值對(duì)殘?jiān)|(zhì)量進(jìn)行修正后，進(jìn)行最終計(jì)算。將過(guò)濾后的清液濃縮、去離子處理后，用HPLC 法分析 SDFS。
設(shè)備要求：
ii. 不溶性膳食纖維（IDF）、SDFP 和 SDFS 的測(cè)定
將孵育混合物水溶液進(jìn)行過(guò)濾，以回收 IDF，并對(duì)濾渣進(jìn)行洗滌、干燥和稱量。使用酒精或工業(yè)基化酒精（IMS）沉淀濾液中的 SDFP，然后對(duì)沉淀物進(jìn)行回收、干燥并稱重。用蛋白質(zhì)、灰分和空白值對(duì) IDF 和 SDFP 殘?jiān)|(zhì)量進(jìn)行修正，并最終計(jì)算 IDF 和 SDFP 的質(zhì)量。已沉淀并去除 SDFP 的乙醇溶液濾液（即含SDFS 的濾液），依次經(jīng)過(guò)濃縮和去離子處理后，用 HPLC 法進(jìn)行分析。這些方法中使用的酶純度非常高；不含可分解 β-葡聚糖、果膠和阿拉伯木聚糖的雜質(zhì)酶（表 3）。低聚果糖和低聚半乳糖等不可消化的寡糖（NDO）不會(huì)被水解（表 2），Polydextrose®的水解度與供應(yīng)商提供的信息一致。
表 3：分析質(zhì)控樣品，以確保使用的酶活力合適，且不存在雜酶活力（質(zhì)控樣品可在 Megazyme 的 K-TDFC 試劑盒中獲�。�。對(duì)照分析應(yīng)貫穿整個(gè)檢測(cè)程序。
4 號(hào)瓶：（x2）
5 號(hào)瓶：
a . 檢測(cè)過(guò)程中不應(yīng)存在這一酶活力。
b . 檢測(cè)過(guò)程中，這一酶活力應(yīng)當(dāng)充分發(fā)揮作用。
c . 造成數(shù)值較低的主要原因是樣品中的水分含量。在孵育過(guò)程中不添加酶的情況下，也可獲得相近數(shù)值。
d . .這類物質(zhì)含有大量抗酶解淀粉。這一膳食纖維值高于 AOAC 方法 991.43 的測(cè)定值（29.3%）。
試劑盒：
1 號(hào)瓶：（×2）
純化 PAA（40 KU/g）和 AMG（17 KU/g）混合物；5.2g。儲(chǔ)存在低于-10℃的干燥環(huán)境下可穩(wěn)定 5 年以上。
注意：粉末狀的酶混合物可能導(dǎo)致一些人嚴(yán)重過(guò)敏。因此，酶混合物的稱重和處理必須在通風(fēng)柜中進(jìn)行；請(qǐng)參[C(d)]。
2 號(hào)瓶：
純化蛋白酶（E-BSPAMS）（10.5 mL 3.2 M 硫酸銨溶液，350 酪氨酸 U/mL）。在 4℃下可穩(wěn)定 3 年以上。
3 號(hào)瓶：
液相色譜保留時(shí)間標(biāo)準(zhǔn)品【麥芽糊精與麥芽糖（比例4:1）】，約 5 g。
可穩(wěn)定 3 年以上；應(yīng)置于室溫下密封保存。
4 號(hào)瓶：（x2）
丙三醇標(biāo)準(zhǔn)溶液（100 mg/mL，55 mL）。
在 4°C 下可穩(wěn)定 4 年以上；應(yīng)置于 4°C 下密封保存。
5 號(hào)瓶：
D- 葡萄糖 / 丙三醇（ Glu/Gly ）標(biāo)準(zhǔn)溶液（均為 10mg/mL，溶解于 0.02%（w/v）疊氮化鈉中）。在 4 °C下可穩(wěn)定 4 年以上；應(yīng)置于 4 °C 下密封保存。
B.
設(shè)備要求：
a. 磨碎機(jī)——離心磨碎機(jī)，12 齒轉(zhuǎn)子，篩網(wǎng)孔徑為 0.5 mm，或類似設(shè)備。作為替代方案，小劑量實(shí)驗(yàn)室試樣也可使用旋風(fēng)磨碎機(jī)磨碎，前提是磨碎機(jī)氣流充足或者采用其他冷卻措施來(lái)避免樣品過(guò)熱。
b. 消化瓶——250 mL Fisherbrand®蘇打玻璃寬口瓶，聚乙烯瓶蓋（貨號(hào)：FB73219）。
c. 燒結(jié)玻璃坩堝——古氏玻璃坩堝，燒結(jié)底盤，Pyrex® 50 mL，大孔徑，美國(guó)材料與試驗(yàn)協(xié)會(huì)（ASTM）40-60 mm，Corning®型號(hào) 32940-50C。
依照以下步驟為每個(gè)樣品準(zhǔn)備四個(gè)坩堝：
i. 將坩堝在馬弗爐中 525 ℃灼燒過(guò)夜，將馬弗爐冷卻至 130 ℃，取出坩堝，避免坩堝破裂。
ii. 使用真空抽力，清除任何殘留的 Celite®硅藻土和灰分。
iii. 將坩堝置于 2 %的清潔溶液[C(o)]中，室溫浸泡 1 小時(shí)。
iv. 用水和去離子水沖洗坩堝。
v. 最后用 15 mL 丙酮沖洗坩堝，空氣干燥。
vi. 在已干燥的坩堝中加入約 1.0 g Celite®硅藻土，并在 130 ℃下干燥至恒重。
vii. 將坩堝置于干燥器中冷卻約 1 小時(shí)，記錄裝有 Celite®硅藻土的坩堝質(zhì)量。
d. 過(guò)濾燒瓶——1 L 厚壁布氏側(cè)臂燒瓶（圖 6，第 19 頁(yè)）。
e. 橡膠環(huán)連接器——用于連接坩堝和過(guò)濾燒瓶（圖 6，第 19 頁(yè)）。
d. 過(guò)濾燒瓶——1 L 厚壁布氏側(cè)臂燒瓶（圖 6，第 19 頁(yè)）。
e. 橡膠環(huán)連接器——用于連接坩堝和過(guò)濾燒瓶（圖 6，第 19 頁(yè)）。
f. 真空源——真空泵或可調(diào)節(jié)真空度的抽氣機(jī)（例如，Edwards XDS 10；單相 115/230V；產(chǎn)品代碼：A726-01-903）。
g. 水浴裝置——在浸入式熱水�。ɡ� Lauda Alpha®）中，放置一個(gè) 2 mag Mixdrive 15®潛水式磁力攪拌器，用 30×7 mm 攪拌子以 170 rpm 轉(zhuǎn)速攪拌（圖 4，第 19 頁(yè)）�；蚩刹捎么笕萘浚�20-24 L）帶蓋振蕩水浴槽（150rpm），溫度可維持在 37±1 °C 和 60±1 °C（例如 Grant® OLS 200 振蕩水浴槽）（圖 5，第 19 頁(yè)）。
h. 天平——最小分度值、準(zhǔn)確度和精度均為 0.1 mg。
i. 烘箱——兩臺(tái)機(jī)械對(duì)流式烘箱，溫度設(shè)定為 105±2 ℃和 130±3 ℃。
j. 計(jì)時(shí)器。
k. 干燥器——氣密干燥器，裝有硅膠或等效干燥劑。每?jī)芍軐⒏稍飫┲糜诤?/span>
箱中在 130℃下干燥過(guò)夜。
l. pH 計(jì)。
m. 正位移移液器——例如 Eppendorf Multipette®-帶 25 mL Combitip®移液管（用于移取 5 mL PAA/AMG 溶液，3 mL 0.75 MTris 堿溶液和 4 mL 2M 乙酸溶液）。
-帶 5.0 mL Combitip®移液管（用于移取 0.1 mL 蛋白酶溶液）。
n. 分液器——用于移取 15±0.5 mL 78%（v/v）乙醇（或 IMS）、95%（v/v）乙醇、丙酮，以及 35±0.2 mL 緩沖液。
o. 量筒——100 mL 和 500 mL 刻度量筒。
p. 磁 力 攪 拌 器 和 攪 拌 子 ——7×30 mm ， 光滑表面磁力攪拌子 ， VWR International，型號(hào) 442-0269。
q. 橡膠刮刀——VWR International，型號(hào) 53801-008（圖 6，第 19 頁(yè)）。
r. 馬弗爐——525±5 °C。
s. 聚 丙 烯 試 管 ——Sarstedt 聚丙烯試管 ， 13 mL ， 101×16.5 mm （ 型 號(hào) 60.541.685）。
t. 液相色譜儀——烘箱可將柱溫維持在 80 ℃，配 50 μL 進(jìn)樣環(huán)。液相系統(tǒng)必須能夠分離麥芽糖和麥芽三糖。
u. 保護(hù)柱（或預(yù)柱）——TSK®保護(hù)柱 PWXL 6.0 mm 內(nèi)徑×4 cm（Tosoh Corp.，型號(hào) TSKgel® G2500PWXL）。
v. 陽(yáng)離子和陰離子交換保護(hù)柱（去離子柱）——陽(yáng)離子和陰離子交換保護(hù)柱，分別為 H +和 CO2 3-型（Bio-Rad Laboratories，型號(hào) 125-0118，包括一個(gè)陽(yáng)離子柱和一個(gè)陰離子柱），以及一個(gè)保護(hù)柱支架（Bio-Rad Laboratories，型號(hào)125-0139），以支撐兩個(gè)保護(hù)柱，陽(yáng)離子柱在前，陰離子柱在后[14]（圖 7，第 19 頁(yè)）。
w. 液相色譜柱——兩個(gè)串聯(lián)的液相色譜柱。TSKgel® G2500PWXL，7.8 mm 內(nèi)徑×30 cm（Tosoh Corp）；流速為 0.5 mL/min；柱溫 80 ℃；運(yùn)行時(shí)間為 60分鐘，以確保樣品全部流出色譜柱（圖 8，第 20 頁(yè)）。
x. 檢測(cè)器——折光率（RI）檢測(cè)器；溫度維持在 50 ℃。
y. 數(shù)據(jù)集成器或計(jì)算機(jī)——用于測(cè)量峰面積。
z. 一次性注射器的濾膜——Millipore Millex®針頭式過(guò)濾器，孔徑為 0.45 μm（低蛋白結(jié)合 Durapore PVDF 濾膜），直徑為 25 或 13 mm，或其它等效濾膜。
aa. 濾水濾膜——Millipore，孔徑 0.45 μm 的 Durapore® HVLP 型濾膜，直徑為47 mm。
bb. 過(guò)濾裝置——支持直徑為 47 mm、孔徑為 0.45 μm 的濾膜[B(aa)]；可并過(guò)濾更大量的水。
cc. 注射器——一次性 10 mL 塑料注射器。
dd.. 液相色譜上樣針——Hamilton® 100 μL 710SNR 上樣針。
ee. 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器——Heidolph Laborota® 4000 型或等效儀器。
ff. 微量離心機(jī)——轉(zhuǎn)速可達(dá) 13000 rpm。
gg. 溫度計(jì)——最高測(cè)量溫度至少為 110 °C。
試劑：
C.
試劑：
a. 乙醇（或 IMS）95%（v/v）。
b. 乙醇（或 IMS）78%（v/v）——將 180 mL 去離子水倒入一個(gè) 1 L 的容量瓶中。用 95%（v/v）乙醇（或 IMS）稀釋定容至刻度線，攪拌均勻。
c. 丙酮，試劑級(jí)。
d. PAA/AMG 儲(chǔ)備液——PAA（4 KU/5mL）和 AMG（1.7 KU/5mL）。將 1.0g PAA/AMG 粉末混合物（1 號(hào)瓶，第 6 頁(yè)）添加至 50 mL 馬來(lái)酸鈉緩沖液[C(g)]中，在磁力攪拌器上攪拌 5 分鐘，臨用現(xiàn)配。使用時(shí)置于冰上，并于制備后 4 小時(shí)內(nèi)使用。
注意 1：如果分析員對(duì)粉末狀 PAA 和/或 AMG 過(guò)敏，應(yīng)由一位對(duì)粉末混合物不過(guò)敏的分析員按照以下步驟將酶粉制備為硫酸銨懸浮液：將 5 gPAA/AMG 粉末混合物（PAA 40 KU/g 和 AMG 17 KU/g，1 號(hào)瓶，第 6 頁(yè)）緩慢添加至裝有 70 mL 冷蒸餾水的 200 mL 燒杯中，置于通風(fēng)柜中磁力攪拌，直至酶粉完全溶解（約 5 分鐘）。
加入 35 g 顆粒硫酸銨，攪拌溶解。用硫酸銨溶液（50 g/100 mL）定容至100 mL。在 4 ℃下可穩(wěn)定 3 個(gè)月。
e. 溶解于 3.2M 硫酸銨溶液中的蛋白酶（50 mg/mL；350 酪氨酸 U/mL）——直接使用 2 號(hào)瓶（第 6 頁(yè)）內(nèi)容物。使用前輕輕旋動(dòng)內(nèi)容物，使懸浮物質(zhì)均勻分布。蛋白酶必須不含 α-淀粉酶，基本不含 β-葡聚糖酶和 β-木聚糖酶。使用時(shí)置于冰上。在 4℃下可穩(wěn)定 3 年以上。
f. 去離子水。
g. 馬來(lái)酸鈉緩沖液——50 mM、pH 6.0 加上 2 mM CaCl2。將 11.6 g 馬來(lái)酸溶解于 1600 mL 去離子水中，用 4 M（160 g/L）NaOH 溶液調(diào)節(jié) pH 至 6.0。加入 0.6 g 二水氯化鈣（CaCl2.2H2O），溶解并定容至 2 L。將溶液保存在密封良好的 Duran®瓶中，加入兩滴甲苯以防止微生物污染。在 4 °C 下可穩(wěn)定約 1 年。
h. 0.7 5M Tris 溶液——將 90.8 g Tris 緩沖鹽（Megazyme 貨號(hào) B-TRIS500）溶解于約 800 mL 去離子水中。將 pH 值調(diào)節(jié)至 11，并定容至 1 L。室溫下可穩(wěn)定約 1 年。
i. 2 M 乙酸溶液——將 115 mL 冰乙酸（Sigma W200611-1KG-K）加入到 1 L的容量瓶中。用去離子水稀釋定容至 1 L。室溫下可穩(wěn)定 1 年以上。
j. 疊氮化鈉溶液（0.02%（w/v））——將 0.2 g 疊氮化鈉添加至 1 L 去離子水中，攪拌溶解。
注意 2：不得將疊氮化鈉加至低 pH 溶液中，疊氮化鈉酸化會(huì)釋放有毒氣體。處理疊氮化鈉前應(yīng)仔細(xì)閱讀安全數(shù)據(jù)表（SDS），使用時(shí)應(yīng)穿戴適當(dāng)?shù)膫�(gè)人防護(hù)設(shè)備，在實(shí)驗(yàn)室通風(fēng)柜中小心處理。
室溫下可穩(wěn)定 4 年以上。
k. 用于測(cè)定 HPLC 響應(yīng)因子的 D-葡萄糖/丙三醇標(biāo)準(zhǔn)溶液——均為 10 mg/mL，溶液為 0.02%（w/v）疊氮化鈉。直接使用 5 號(hào)瓶（第 6 頁(yè)）內(nèi)容物。
在 4 ℃下可穩(wěn)定 4 年以上。
l. 丙三醇（TSK®凝膠滲透色譜柱內(nèi)標(biāo)物）——100 mg/mL，含 0.02%（w/v）疊氮化鈉。直接使用 4 號(hào)瓶?jī)?nèi)容物（第 6 頁(yè)）。
在 4 ℃下可穩(wěn)定 4 年以上。
m. 液相色譜保留時(shí)間標(biāo)準(zhǔn)品——標(biāo)準(zhǔn)品中玉米糖漿干粉寡糖（DP>3）（DE25；日本兵庫(kù)縣伊丹市松谷化學(xué)；（www.matsutani.com））與麥芽糖的比例為 4:1（w/w）。稱取 2.5 g 混合物（3 號(hào)瓶，第 6 頁(yè)）溶解于 80 mL 0.02 %疊氮化鈉溶液中，定量轉(zhuǎn)移至一個(gè) 100 mL 的容量瓶中。用移液器移取 10mL 內(nèi)標(biāo)物溶液[C(l)]至容量瓶中，并用 0.02 %疊氮化鈉溶液[C(j)]定容至100 mL，將溶液分裝到 50 mL 的聚丙烯瓶中。室溫下可穩(wěn)定 1 年以上；在-10°C 以下可穩(wěn)定 4 年以上。
n. pH 標(biāo)準(zhǔn)液——pH 值為 4.0、7.0 和 10.0 的緩沖溶液。
o. 清潔溶液——Micro-90®（美國(guó) International Products Corp.，貨號(hào) M-9033，www.ipcol.com/shopexd.asp?id=15）。用去離子水配制 2 %的清潔溶液。
p. 陽(yáng)離子交換樹脂——Amberlite® FPA53 (OH- )樹脂（Megazyme 貨號(hào)：G-AMBOH），離子交換容量不小于 1.6 meq/mL（制造商提供的 R-OH-交換容量數(shù)據(jù)）
q. 陰 離 子 交 換 樹 脂 ——Ambersep®200 (H+ ) 樹脂或 其 它 等 效 產(chǎn) 品 ， （Megazyme 貨號(hào)：G-AMBH），離子交換容量：不小于 1.6 meq/mL（制造商提供的 R-H+交換容量數(shù)據(jù)）。
r. Celite®硅藻土——預(yù)酸洗和預(yù)灰化處理的硅藻土（Megazyme 貨號(hào)：G-CELITE）。
D.試樣制備：
采集和制備的樣品應(yīng)當(dāng)是可以直接食用的形態(tài)，例如，烘焙粉應(yīng)制作成食物并烤熟，意大利面應(yīng)煮熟。如果脂肪含量>10%，則應(yīng)依照 AOAC 985.29 進(jìn)行脫脂處理。對(duì)于含水量較高（>25%）的樣品，最好是進(jìn)行冷凍干燥。稱取約 50 g樣品置于磨碎機(jī)[B(a)]中磨碎，過(guò) 0.5 mm 篩網(wǎng)，將所有樣品轉(zhuǎn)移至一個(gè)寬口塑料罐中，通過(guò)振蕩和顛倒搖晃混合均勻。加入干燥包后儲(chǔ)存。
E. 酶純度：
為保證不含雜酶，且獲得理想的酶活力，若酶已經(jīng)儲(chǔ)存 12 個(gè)月以上，需用標(biāo)準(zhǔn)品驗(yàn)證酶的有效性（Megazyme 貨號(hào) K-TDFC）。
F. 樣品的酶解：
(1)空白
在每組檢測(cè)中，對(duì)每個(gè)樣品配置兩個(gè)空白，以測(cè)量試劑對(duì)殘?jiān)|(zhì)量的貢獻(xiàn)值。
(2)樣品
(a) 準(zhǔn)確稱取約 1 g 樣品，精確至小數(shù)點(diǎn)后第三位。一式兩份，分別裝入兩個(gè)250 mL 的 Fisherbrand®玻璃瓶中[B(b)]。記錄稱得的質(zhì)量。
(b) 添加酶——用 1.0 mL 的 95%乙醇（或 IMS）[C(a)]浸潤(rùn)樣品，然后加入 35mL 馬來(lái)酸鈉緩沖液[C(g)]，兩瓶樣品進(jìn)行相同操作。蓋上瓶蓋，將樣品瓶置于 Grant OLS 200 振蕩孵育器（或類似儀器）[B(g)]中，用彈簧或聚丙烯支架將玻璃瓶固定在搖床上（圖 5，第 19 頁(yè)）。平衡 5 分鐘，使溶液溫度達(dá)到水浴溫度。或者，使用一個(gè) 2 mag Mixdrive 15®浸沒(méi)式磁力攪拌器[B(g)]，用 7×30 mm 攪拌子[B(p)]攪拌（圖 4，第 19 頁(yè)）。
(c) 用 PAA/AMG 溶液孵育——加入 5 mL PAA/AMG 溶液[C(d)]，蓋上瓶蓋，將樣品瓶置于振蕩水浴槽中，37℃、150rpm 振蕩孵育[B(g)]4 小時(shí)整�；蛘呤褂� 2 mag Mixdrive 15®浸沒(méi)式磁力攪拌器以 170 rpm 轉(zhuǎn)速（確保顆粒完全離底懸�。⿺嚢� 4 小時(shí)整。注意：若使用酶制劑的硫酸銨懸浮液[C(d)]，則應(yīng)添加 2 mL 酶懸浮液和 3 mL 馬來(lái)酸鈉緩沖液[C(g)]。
(d) 將 pH 值調(diào)節(jié)至約 8.2（pH7.9-8.4），使 α-淀粉酶和 AMG 失活——4 小時(shí)后，從振蕩水浴槽中取出所有樣品瓶，并立即加入 3.0 mL 的 0.75 M Tris 緩沖液[C(h)]，以終止反應(yīng)（同時(shí)，如果只有一個(gè)水浴槽，則應(yīng)將水浴槽溫度調(diào)高至 60 ℃，為蛋白酶孵育步驟做好準(zhǔn)備）。略微擰松樣品瓶瓶蓋，并立即將樣品瓶置于 95 ℃至 100 ℃的水浴槽中（不振蕩），孵育 20 分鐘，期間偶爾用手振搖。使用溫度計(jì)確保樣品瓶?jī)?nèi)容物的最終溫度高于 90 ℃（僅檢查一個(gè)樣品瓶的溫度即可）。
(e) 冷卻——佩戴隔熱手套，將所有樣品瓶從沸水浴中取出，并置于 60 ℃的水浴槽中，讓溫度在 10 分鐘內(nèi)平衡至約 60 ℃。
(f) 蛋白酶處理——用正位移液器加入 0.1 mL 蛋白酶懸液（2 號(hào)瓶，第 6 頁(yè)）[C(e)]（溶液較為粘稠），60 ℃孵育 30 分鐘。
(g) 調(diào)節(jié) pH——向兩個(gè)樣品瓶中分別加入 4.0 mL 的 2M 乙酸[C(i)]并混合均勻，以調(diào)節(jié) pH 值。最終 pH 值約為 4.3。
(h) 內(nèi)標(biāo)物——分別加入兩個(gè)樣品瓶中加入 1.0 mL 丙三醇內(nèi)標(biāo)物溶液（100mg/mL；4 號(hào)瓶，第 6 頁(yè)）[C(l)]，并混合均勻。
(i) 執(zhí)行步驟[G(a)]以測(cè)定 HMWDF（IDF+SDFP），或者執(zhí)行步驟[H(a)]以測(cè)定 IDF、SDFP 和 SDFS。
注意：
如需測(cè)定可利用碳水化合物，準(zhǔn)確轉(zhuǎn)移 0.5 mL 孵育溶液至一微量離心管中，13000 rpm 離心 3 分鐘。轉(zhuǎn)移 0.2 mL 上清液至一 13 mL（101×16.5mm）聚丙烯試管中，并添加 5 mL 蒸餾水。蓋上試管蓋，于-10°C 以下保存。使用Megazyme 可利用碳水化合物測(cè)定試劑盒（K-AVCHO）進(jìn)行可利用碳水化合物分析。
G. 測(cè)定 HMWDF（IDF 和 SDFP）：（與 AOAC 方法 2009.01 的程序相同）：
(a) 沉淀 SDFP——將樣品預(yù)熱至 60 ℃，加入 220 mL 95 %（v/v）乙醇或IMS[C(a)]（在室溫下量取，預(yù)熱至 60 ℃）�；旌暇鶆颍覝爻恋� 60 分鐘（也可過(guò)夜沉淀）。
(b) 準(zhǔn)備過(guò)濾——稱量裝有 Celite®硅藻土[B(c)]的坩堝重量，精確到 0.1 mg。用洗瓶操作，用 15 mL 78 %（v/v）乙醇或 IMS[C(b)]浸潤(rùn)并重新分配坩堝中的 Celite®硅藻土層。用適度的抽力將坩堝中的 Celite®硅藻土平整地分布于燒結(jié)玻璃底盤上（圖 6，第 19 頁(yè)），倒掉濾液。
(c) 過(guò)濾——利用真空抽力，用坩堝過(guò)濾沉淀的酶消化物[G(a)]。使用一個(gè)裝有78 %（v/v）乙醇或 IMS 的洗瓶，將所有殘余酶消化物定量轉(zhuǎn)移至坩堝中，并用 15 mL 78 %（v/v）乙醇（或 IMS）[C(b)]洗滌殘?jiān)�。保留濾液和洗液，并用 78 %乙醇定容至 300 mL，然后執(zhí)行第 16 頁(yè)的步驟[I(a)]，以測(cè)定SDFS。
(d) 洗滌——利用真空抽力，依次用 15 mL 以下溶液洗滌殘?jiān)鼉纱危?8 %（v/v）乙醇（或 IMS）[C(b)]、95 %（v/v）乙醇（或 IMS）[C(a)]和丙酮[C(c)]。倒掉洗滌液，繼續(xù)用真空泵抽至少 2 分鐘，以確保在將坩堝置于烘箱干燥之前已清除所有丙酮。
(e) 干燥坩堝——將裝有殘?jiān)嫩釄逯糜?105 ℃烘箱中，干燥過(guò)夜。若使用強(qiáng)風(fēng)型烘箱，則應(yīng)用鋁箔松散覆蓋住坩堝口，以防止樣品損失。
(f) 將坩堝置于干燥器中冷卻約 1 小時(shí)。稱量坩堝重量（包含膳食纖維殘?jiān)虲elite®硅藻土），精確到 0.1 mg。將稱得的質(zhì)量減去坩堝和 Celite®硅藻土的質(zhì)量，即得殘?jiān)|(zhì)量。
(g) 蛋白質(zhì)和灰分的測(cè)定——取其中一個(gè)坩堝的殘?jiān)糜诜治龅鞍踪|(zhì)，另一個(gè)坩堝的殘?jiān)糜诜治龌曳�。用凱氏定氮法（Kjeldahl）或燃燒法對(duì)殘?jiān)M(jìn)行蛋白質(zhì)分析（使用燃燒法分析儀時(shí)務(wù)必小心。樣品中揮發(fā)出的 Celite®硅藻土可能堵塞分析儀的傳輸管）。在所有情況下均應(yīng)使用 6.25 作為系數(shù)來(lái)計(jì)算蛋白質(zhì)質(zhì)量。將另一份殘?jiān)?525 °C 馬弗爐[B(r)]中灼燒 5 個(gè)小時(shí)，于干燥器中冷卻，并稱重至 0.1 mg，減去坩堝和 Celite®硅藻土的質(zhì)量，即得灰分質(zhì)量。
(h) 計(jì)算 HMWDF（IDF+SDFP）和 SDFS 質(zhì)量——執(zhí)行步驟[J]（第 17 頁(yè)）。
H. 分別測(cè)定 IDF 和 SDFP：（與 AOAC 方法 2011.25 的程序相同）：
IDF
(a) 準(zhǔn)備過(guò)濾——稱量裝有 Celite®硅藻土[B(c)]的坩堝重量，精確到 0.1 mg。用洗瓶操作，用 15 mL 78 %（v/v）乙醇或 IMS[C(b)]浸潤(rùn)并重新分配坩堝中的 Celite®硅藻土層。用適度的抽力將坩堝中的 Celite®硅藻土平整地分布于燒結(jié)玻璃底盤上（圖 6，第 19 頁(yè)），倒掉濾液。
(b) 過(guò)濾——利用真空抽力，用坩堝過(guò)濾步驟[F(2)(a)]的酶消化物。使用一個(gè)裝有 60 ℃去離子水的洗瓶，用最少量（約 10 mL）的水沖洗孵育瓶，并使用一個(gè)橡膠棒（或鏟）[B(q)]輔助轉(zhuǎn)移容器內(nèi)壁上的所有顆粒。將懸浮液轉(zhuǎn)移至坩堝中，再次用 10 mL 60 ℃的水洗滌孵育瓶，并將懸浮液轉(zhuǎn)移至坩堝中。收集濾液和洗滌液，并定容至 70 mL，用于測(cè)定 SDFP[H(f)]和 SDFS[H(g)]。
(c) 洗滌——利用真空抽力，依次用 15 mL 以下溶液洗滌殘?jiān)鼉纱危?8 %（v/v）乙醇（或 IMS）[C(b)]、95 %（v/v）乙醇（或 IMS）[C(a)]和丙酮[C(c)]。倒掉洗滌液，繼續(xù)用真空泵抽至少 2 分鐘，以確保在將坩堝置于烘箱干燥之前已清除所有丙酮。
(d) 干燥坩堝——將裝有殘?jiān)嫩釄逯糜?105 ℃烘箱中，干燥過(guò)夜。
(e) 冷卻坩堝和測(cè)定 IDF。冷卻坩堝，并依照步驟[G(e)]至[G(f)]測(cè)定殘?jiān)|(zhì)量。依照步驟[G(g)]測(cè)定蛋白質(zhì)和灰分，并在殘?jiān)|(zhì)量中扣除蛋白質(zhì)和灰分質(zhì)量。依照步驟[J]計(jì)算 IDF（請(qǐng)參閱注意，第 16 頁(yè)）。
SDFP
(f) 沉淀 SDFP——將步驟[H(b)]獲得的各個(gè)樣品的濾液（約 70 mL）預(yù)熱至60 ℃，并添加 320 mL 95 %（v/v）乙醇或 IMS[C(a)]（在室溫下量取，再預(yù)熱至 60 ℃），并混合均勻。室溫沉淀 60 分鐘（也可過(guò)夜沉淀）。
(g) 過(guò)濾和回收 SDFP 和 SDFS——過(guò)濾懸浮液并回收殘?jiān)�，分析蛋白質(zhì)和灰分，并依照步驟[G(b)]至[G(g)]計(jì)算 SDFP。保存濾液和洗滌液（約 420 mL），并執(zhí)行步驟[I(a)]來(lái)測(cè)定 SDFS。
I. 測(cè)定 SDFS：
注意：正確地去除溶液中的離子是獲取優(yōu)質(zhì)色譜數(shù)據(jù)的必要條件。參閱圖 9（第 20 頁(yè)）以比較在存在和不存在緩沖鹽的情況下，丙三醇和 D-葡萄糖生成的色譜圖。為確保使用的樹脂具有充分的去離子能力，將 0.1 mL 蛋白酶懸浮液（2 號(hào)瓶，第 6 頁(yè)）添加至 40 mL 馬來(lái)酸緩沖液[C(g)]中，并加入 3.0 mL 0.75M Tris 堿溶液[C(h)]、4.0 mL 2 M 乙酸[C(i)]、1 mL 丙三醇內(nèi)標(biāo)物溶液（100
mg/mL；4 號(hào)瓶，第 6 頁(yè)）[C(l)]和 1 mL D-葡萄糖溶液（100 mg/mL），將混合溶液置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上蒸干，用 32 mL 去離子水中復(fù)溶。取 5 mL 該溶液至一個(gè) 13 mL 的聚丙烯試管[B(s)]中，加入 1.5 g Amberlite® FPA53（OH-）樹脂和1.5g Ambersep® 200（H +）樹脂（圖 8，第 20 頁(yè)），蓋上管蓋，并顛倒搖晃試管，持續(xù) 5 分鐘。靜置使樹脂沉底，并使用注射器[B(cc)]取 1.5-2.0 mL 上清液，過(guò) 0.45 μm 聚偏氟乙烯膜[B(z)]。取 50 μL 上 TSK 色譜柱（已安裝去離子預(yù)柱）。應(yīng)得到類似于圖 9c（第 20 頁(yè)）所示的色譜圖，即沒(méi)有明顯的鹽峰。
(a) 濾液回收和濃縮——【若需兩份 SDFS 數(shù)據(jù)，應(yīng)將其中一份重復(fù)樣品的濾液[G(c)]或[H(g)]留存?zhèn)溆谩�。取第二份重�?fù)樣品的濾液[G(c)]或[H(g)]的四分之一【即~75 mL 的[G(c)]或~105 mL 的[H(g)]】，置于 500 mL 的旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)瓶，60℃下真空蒸干，用 8 mL 去離子水復(fù)溶。
(b) 樣品去離子——將 5 mL 步驟[I(a)]中所得的樣品濃縮液轉(zhuǎn)移至一個(gè) 13 mL的聚丙烯試管[B(s)]中（樣品中含丙三醇內(nèi)標(biāo)物，因此無(wú)須定量轉(zhuǎn)移）。在試管中加入約 1.5 g Amberlite® FPA53（OH-）樹脂[C(p)]和 約 1.5 gAmbersep® 200（H +）樹脂[C(q)]，將試管顛倒搖晃 3 至 4 分鐘（圖 8，第20 頁(yè)）。
(c) 制備用于液相色譜分析的樣品——將溶液轉(zhuǎn)移至一個(gè) 10 mL 的一次性注射器[B(cc)]中，過(guò) 0.45 µm 濾膜[B(z)]。也可將 1 mL 溶液轉(zhuǎn)移至微量離心管[B(ff)]中，13000 rpm 離心 3 分鐘。用一個(gè) 100 μL 液相色譜玻璃上樣針[B(dd)]上 50 μL 樣至色譜儀[B(t)]。對(duì)樣品進(jìn)行一次分析便已足夠。色譜柱：一根去離子預(yù)柱[B(v)]加兩根 TOSOH TSK 凝膠滲透色譜柱[B(w)]。溶劑：經(jīng)微濾[B(bb)]的蒸餾水。流速：0.5 mL/min；每次運(yùn)行 60 分鐘。溫度：80 °C（圖 7，第 19 頁(yè)）。
(d) 測(cè)定 D-葡萄糖的響應(yīng)因子——由于 D-葡萄糖的液相色譜折光率（RI）響應(yīng)因子與組成 SDFS 的不可消化的寡糖的響應(yīng)因子相當(dāng)，因此 D-葡萄糖被用來(lái)校準(zhǔn)液相色譜儀，其響應(yīng)因子也被用于計(jì)算 SDFS 質(zhì)量。用一個(gè) 100 μL液相色譜上樣針將 50 μL 的 D-葡萄糖/丙三醇內(nèi)標(biāo)物溶液（5 號(hào)瓶，第 6 頁(yè)）上樣至液相色譜儀，做兩個(gè)平行。依照步驟[J(b)](1)]計(jì)算響應(yīng)因子。
(e) 校準(zhǔn)用于計(jì)算 SDFS 的峰面積——用一個(gè) 100 μL 液相色譜上樣針將 50 μL的保留時(shí)間標(biāo)準(zhǔn)品[C(m)]（3 號(hào)瓶；第 6 頁(yè)）上樣至液相色譜儀，做兩個(gè)平行。確定 DP2 和 DP3 寡糖（麥芽糖 vs 聚合度更高的寡糖）的分界點(diǎn)（圖 3，第 4 頁(yè)）。
(f) 確定樣品提取物色譜圖中 SDFS（PASDFS）和內(nèi)標(biāo)物（PAIS）的峰面積——將樣品提取物[I(c)]上樣至液相色譜儀。將 DP 高于 DP2/DP3 分界點(diǎn)的所有峰面積記錄為 PASDFS，將內(nèi)標(biāo)物的峰面積記錄為 PAIS。
(g) 執(zhí)行步驟[J(b)(2)]。
J. 計(jì)算總膳食纖維含量：HMWDF（IDF+SDFP）+SDFS
（a） HMWDF（IDF+SDFP）（重量分析法）
（a） HMWDF（IDF+SDFP）（重量分析法）
（1） 測(cè)定空白值（B，mg）
式中 BR1 和 BR2 分別為兩份重復(fù)空白樣測(cè)定的殘?jiān)|(zhì)量（mg）；PB 和 PA 為用
兩份空白殘?jiān)謩e測(cè)定的蛋白質(zhì)和灰分質(zhì)量（mg）。
圖 8：對(duì)用于 HPLC 分析的樣品進(jìn)行去離子處理。5 mL 濃縮洗脫液與 1.5 g Amberlite® FPA53(OH- )樹脂和 1.5g Ambersep®200(H+ )樹脂混合。
圖 9：
（2） 測(cè)定 [IDF+SDFP]
式中 M1=樣品質(zhì)量 1（g）；M2=樣品質(zhì)量 2（g）；R1=M1的殘?jiān)|(zhì)量 1（mg）；R2=M2 的殘?jiān)|(zhì)量 2（mg）；PA=R1 的灰分質(zhì)量（mg）；PB=R2 的蛋白質(zhì)質(zhì)量（mg）；B=測(cè)定的空白值[J(a)(1)]（mg）。
注意：?jiǎn)为?dú)測(cè)定 IDF 和 SDFP 時(shí)也是使用上述公式。[參閱步驟 H(a)和 H(f)] 。
（b） SDFS（HPLC 法）
（1） 測(cè)定 D-葡萄糖響應(yīng)因子
從兩份重復(fù)樣品的色譜圖中獲取 D-葡萄糖和內(nèi)標(biāo)物（丙三醇）的峰面積數(shù)值。D-葡萄糖與丙三醇的峰面積之比與 D-葡萄糖與丙三醇的質(zhì)量之比的比率即“響應(yīng)因子”。D-葡萄糖對(duì)丙三醇的響應(yīng)因子約為 0.82。
響應(yīng)因子（Rf）=
式中 PAGlu=D-葡萄糖峰面積；PAIS=內(nèi)標(biāo)物（丙三醇）峰面積；WtGlu=1 mL D-葡萄糖/丙三醇標(biāo)準(zhǔn)溶液中的 D-葡萄糖質(zhì)量（10 mg）；WtIS=1mL D-葡萄糖/丙三醇標(biāo)準(zhǔn)溶液中的內(nèi)標(biāo)物（丙三醇）質(zhì)量（10 mg）。
（2） 測(cè)定 SDFS
式中，Rf=響應(yīng)因子；WtIS=過(guò)濾前加入到樣品中的 1 mL 丙三醇內(nèi)標(biāo)物溶液中的內(nèi)標(biāo)物質(zhì)量（100 mg/mL，即 100 mg）；PASDFS=SDFS 組分的峰面積；PAIS=丙三醇內(nèi)標(biāo)物峰面積；M=兩份樣品中，濾液用于色譜分析的其中一份樣品的質(zhì)量（M1或 M2），單位為 g。
（c）總膳食纖維
總膳食纖維（g/100g）=[IDF+SDFP]（g/100g）+SDFS（g/100g）
注意：可以使用 Megazyme Mega-CalcTM來(lái)簡(jiǎn)化這些計(jì)算�？稍L問(wèn) Megazyme 網(wǎng)站（www.megazyme.com）下載 Megazyme Mega-CalcTM。
圖 4：置于定制水浴槽中的 2mag Mixdrive 15®浸入式磁力攪拌器�？稍� 37℃下 170 rpm同時(shí)攪拌 15 個(gè)樣品。
圖 5：Grant OLS 200®振蕩水浴槽，溫度設(shè)定為37 ℃，圖中為定制的適配 Fisherbrand®250 mL 玻璃瓶的聚丙烯支架。
圖 6：布氏燒瓶、坩堝、橡膠套筒和真空歧管裝置，用于過(guò)濾膳食纖維樣品。圖中還包括樣品瓶和玻璃棒上的橡膠刮刀。
圖 7：對(duì)采用 TSKgel® G2500PWXL 色譜柱進(jìn)行色譜分析的樣品進(jìn)行在線去離子處理。14
圖 9：
以下樣品在 TSKgel® G2500PWXL 色譜柱上生成的色譜圖
a) 未經(jīng)去離子處理的 RINTDF 孵育緩沖液中的葡萄糖和丙三醇混合物；
b) 取與圖（a）相同的 5 mL 樣品，用 1.5 g Amberlite® FPA53 (OH- )和 1.5 gAmbersep® 200 (H+ )樹脂進(jìn)行去離子處理（如圖 8 所示）；
c) 安裝去離子預(yù)柱后，樣品“b”在相同的 TSK 柱上生成的色譜圖 14。
RINTDF 檢測(cè)程序的實(shí)驗(yàn)室間評(píng)估：
RINTDF 檢測(cè)程序的實(shí)驗(yàn)室間評(píng)估：
本數(shù)據(jù)手冊(cè)中說(shuō)明的 RINTDF 方法是 AOAC 方法 2009.01 的更新，解決了在過(guò)去 8 年里，分析師們?cè)谑褂?AOAC 方法 2009.01 時(shí)面臨的諸多問(wèn)題。本方法在美國(guó)官方分析化學(xué)家協(xié)會(huì)（AOAC International）和國(guó)際谷物科技協(xié)會(huì)（ICC）的組織下接受了實(shí)驗(yàn)室間評(píng)估 15。
共有 13 個(gè)實(shí)驗(yàn)室參與了本方法的實(shí)驗(yàn)室間評(píng)估，所有實(shí)驗(yàn)室都對(duì) 16 份檢樣（8份盲樣，每份兩個(gè)重復(fù)）中的大多數(shù)檢樣得出了有效檢測(cè)數(shù)據(jù)。檢樣由不同含量的傳統(tǒng)膳食纖維、抗性淀粉和不可消化的寡糖組成。8 對(duì)檢樣的膳食纖維含量范圍為 6.90 至 60.37 g/100g�？偵攀忱w維含量為采用重量分析法測(cè)定的 IDF加 SDFP 的質(zhì)量，和采用 HPLC 法測(cè)定的 SDFS 的質(zhì)量之和。
由于參考文獻(xiàn) 15 中所述的原因，在進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析時(shí)，剔除了兩個(gè)實(shí)驗(yàn)室的檢測(cè)結(jié)果。剩下 11 個(gè)實(shí)驗(yàn)室的重復(fù)性標(biāo)準(zhǔn)偏差（Sr）范圍為 0.27 至 0.76 g/100 g，再現(xiàn)性標(biāo)準(zhǔn)偏差（SR）范圍為 0.54 至 3.99 g/100 g。相對(duì)重復(fù)性標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSDr）范圍為 1.22 至 6.52 %，相對(duì)再現(xiàn)性標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSDR）范圍為 2.14 至10.62 %（表 4）。這些統(tǒng)計(jì)值與采用其他膳食纖維檢測(cè)方法對(duì)類似樣品測(cè)得的結(jié)果一致 3。基于實(shí)驗(yàn)室間評(píng)估的結(jié)果，RINTDF 方法經(jīng) AOAC 批準(zhǔn)為方法2017.16，并經(jīng) ICC 批準(zhǔn)為標(biāo)準(zhǔn)草案 185。
表 4：食品總膳食纖維的實(shí)驗(yàn)室間研究結(jié)果（AOAC 方法 2017.16）。根據(jù)AOAC 統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)格式進(jìn)行統(tǒng)計(jì)評(píng)估。
樣品：A&D=磷酸酯交聯(lián)淀粉（Fibersym®）；B&F=花豆（清洗凍干的罐頭裝）；C&J=全谷麥片；E&H=含低聚果糖的脫脂餅干；G&N=燕麥麩；I&M=含葡聚糖和 RS2的脫脂餅干；K&O =黑麥薄脆餅干；L&P=全麥面包。
Sr：重復(fù)性；RSDr：相對(duì)重復(fù)性標(biāo)準(zhǔn)差；SR：再現(xiàn)性；RSDR：相對(duì)再現(xiàn)性標(biāo)準(zhǔn)差。
標(biāo)簽：
快速全組分總膳食纖維檢測(cè)
K-RINTDF
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