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CA72-4檢測試劑盒（酶聯(lián)免疫法）
中文名稱：CA72-4檢測試劑盒（酶聯(lián)免疫法）
英文名稱：CA72-4
貨 號：EIA5071
產(chǎn)品規(guī)格：96人份/盒
注冊證號：國械注進20163402609
【預(yù)期用途】該試劑盒用于在人體血清或血漿中定量檢測腫瘤相關(guān)抗原CA72-4 (TAG-72)，僅供體外診斷使用。
【檢測原理】
DRG公司的TM-CA 72-4酶免實驗是一種基于夾心法原理的固相酶免吸附實驗（ELISA）。反應(yīng)板上的微檢測孔包被有能結(jié)合CA72-4分子上獨特抗原位點的單克隆小鼠抗體。一份含有內(nèi)源性CA72-4的病人樣本在包被孔中與酶聯(lián)物進行孵育，該酶聯(lián)物是一種聯(lián)結(jié)有辣根過氧化物酶的抗CA72-4抗體。孵育后，用洗滌液洗去未結(jié)合的酶聯(lián)物。結(jié)合上的辣根過氧化物酶的總量與樣本中CA72-4的濃度成正相關(guān)。加入底物溶液后，顯出的顏色強度與病人樣品中CA72-4的濃度成正比。
【主要組成成分】
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微孔板：12×8孔，可拆，微孔中包被抗CA72-4 單克隆抗體。
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標準品（標準品0-4）：5支 0.5ml，即用，濃度為0,3，20，50，100U/ml
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質(zhì)控高&低：2支 凍干粉，0.5ml，見“試劑準備”，質(zhì)控品的濃度及范圍請見試劑瓶標簽或質(zhì)控單
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樣品稀釋液：一支，3ml，即用
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酶聯(lián)物：1支 1.4ml，10倍濃縮，標記辣根過氧化物酶的抗CA72-4抗體
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酶聯(lián)物稀釋液：一支，14ml
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底物液：一支 14ml，即用
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終止液：0.5M的硫酸，一支 14ml
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洗滌液（40X）：一支 30ml
注意：用于樣品稀釋的樣品稀釋液應(yīng)視需要而定。
實驗需要器材（但試劑盒不提供）
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酶標儀(450±10nm)。
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移液器
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吸水紙
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蒸餾水
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計時器
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坐標紙或是數(shù)據(jù)處理軟件
【儲存條件】
未開啟的試劑在2-8℃下儲存，在保質(zhì)期內(nèi)保持其穩(wěn)定性。不要使用過期的試劑。所有開啟了的試劑都應(yīng)在2-8℃下儲存，微孔板需在2-8℃下儲存，一旦打開了微孔板的袋子，需小心地將其重新密封。
【樣本要求】
本實驗可使用血清或血漿（使用EDTA或肝素抗凝）樣品，不要使用溶血﹑脂血﹑黃疸的樣品。注意：含疊氮鈉的樣品不能用于此實驗。
樣品采集
血清：
靜脈采血，允許使用凝血，在室溫下用離心法分離血清。全血未完全凝固前請勿離心，接受了抗凝劑治療的病人血液可能需要更長的凝血時間。
血漿：
將全血收集到含有抗凝劑的離心管內(nèi)，收集后馬上用離心法分離。
樣品的儲存
樣品蓋好蓋子后，可在實驗前2-8℃下儲存5天，要更長時間儲存，應(yīng)在-20℃下凍存。在開始實驗前應(yīng)避免反復(fù)凍融樣品。
樣品的稀釋
在最初的實驗中，要是樣品的濃度高于最高標準品，則樣品應(yīng)用按實驗步驟所描述的用樣品稀釋液進行稀釋和重新檢測。在計算濃度時需乘以此稀釋系數(shù)。
例子：
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按1：10稀釋： 10ul的血清+90ul的樣品稀釋液（充分搖勻）。
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按1：100釋�。�10ul稀釋a）稀釋的血清+90ul的樣品釋稀液（充分搖勻）
【檢測方法】
在使用前將所有的試劑和所需的板條平衡至室溫。
質(zhì)控品
在凍干粉中加入0.5ml的蒸餾水使其復(fù)溶，并至少放置10min，在使用前充分搖勻。復(fù)溶后的質(zhì)控品需在-20℃下儲存。
洗滌液
在30ml濃縮的洗滌液中加入1170ml的蒸餾水，最終洗滌液的容積為1200ml。稀釋后的洗滌液在室溫下兩星期內(nèi)保持穩(wěn)定。
酶聯(lián)物
使用酶聯(lián)物稀釋液按1：10稀釋。配制好的酶聯(lián)物在2-8℃下，一周內(nèi)穩(wěn)定。
如：1.2ml酶聯(lián)物于10.8ml稀釋液配制成最終體積12ml。
檢測步驟
每次實驗都應(yīng)含有一條標準曲線
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將實驗所需數(shù)目的板條固定在板架上。
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用一次性吸嘴將20ul的標準品﹑質(zhì)控品和樣品加入相應(yīng)的檢測孔中。
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每孔加入100ul的新鮮配制的酶聯(lián)物。徹底混合十秒，在此步驟里，充分搖勻十分重要。
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在室溫下溫育120分鐘。
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快速棄去檢測孔中的內(nèi)含物，每孔用400ul洗滌液洗板五次，在吸水紙上用力拍板以除去殘留的液體。注意：洗板步驟是否正確將直接影響到實驗的靈敏度和精確性。
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每孔加入100ul的底物液。
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在室溫下溫育30分鐘。
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每孔加入100ul的終止液終止反應(yīng)。
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在加終止液后十分鐘內(nèi)，室溫下，于450±10nm處讀取吸光率。
【結(jié)果計算】
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計算標準品﹑質(zhì)控品和病人樣品的平均吸光率。
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以吸光率為Y軸，濃度為X軸，按照從標準品中獲得的平均吸光率和其相對應(yīng)的濃度值，繪制標準曲線。
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利用樣品的平均吸光率，在標準曲線上得出其相應(yīng)的濃度值。
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自動方法：使用立方函數(shù)﹑四參數(shù)模式或雙對數(shù)的計算機程序可得到結(jié)果。
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樣品的濃度可從標準曲線上直接獲取。樣品的濃度高于最高標準品的濃度則需進一步稀釋。在計算樣品的濃度的時候，要乘以稀釋倍數(shù)。
下面是CA72-4 ELISA的標準曲線的典型例子。
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標準品 |
吸光率（450nm） |
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零標準品（0 U/ml） |
0.08 |
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標準品1（3 U/ml） |
0.19 |
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標準品2（20 U/ml） |
0.59 |
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標準品3（50 U/ml） |
1.16 |
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標準品4（100 U/ml） |
2.02 |
【注意事項】
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在使用前所有試劑和樣品均需平衡至室溫，所有試劑要充分混合但不要起泡。
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一旦實驗開始，所有步驟都必須進行到底而不能中斷。
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對每種試劑﹑標準品和樣品使用一次性的吸嘴，以避免交叉污染。
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吸光率決定于溫育時間和溫度，在開始實驗前，建議準備好所有的試劑，將需要檢測的微孔板固定在板架上，這些步驟保證每次加液步驟所需時間相同而沒有中斷。
按照一般的規(guī)律，酶反應(yīng)時間與溫育時間和溫度成線性比例。
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