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腺病毒包裝

腺病毒包裝


adenovirus
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服務(wù)類別:分子與細(xì)胞總訪問:1201
最后更新:2014-4-19半年訪問:32
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腺病毒包裝: 
腺病毒是一種線性雙鏈DNA病毒,由于其具有宿主范圍廣、可感染分裂和非分裂細(xì)胞、高滴度制備、外源基因裝載容量大等優(yōu)點(diǎn),重組腺病毒已越來越廣泛地被應(yīng)用于基礎(chǔ)研究和臨床試驗(yàn)中,并成為世界上最常用的基因治療載體之一。

腺病毒包裝的優(yōu)點(diǎn):

1、可感染的細(xì)胞種類多,宿主廣泛;

2、感染效率高,特別適合質(zhì)粒載體轉(zhuǎn)染效率低的細(xì)胞,如原代細(xì)胞、神經(jīng)細(xì)胞等,且目的蛋白表達(dá)水平高;

3、可包裝大片段的外源基因,高達(dá)10kb;

4、不整合到細(xì)胞染色體中,生物安全性高。

腺病毒包裝技術(shù)主要原理是將目的片段克隆到腺病毒表達(dá)載體上,表達(dá)載體和包裝質(zhì)粒通過重組導(dǎo)入腺病毒包裝細(xì)胞進(jìn)行包裝,包裝好的病毒進(jìn)一步進(jìn)行擴(kuò)增和滴度測定。

科佰生物擁有豐富的病毒包裝經(jīng)驗(yàn),成功為很多客戶包裝出需要的病毒。公司提供2種較常用的系統(tǒng):AdEasy、AdMAX。

 

Ad-Easy系統(tǒng):

AdEasy包裝系統(tǒng)主要的特點(diǎn)是利用Cre/loxP系統(tǒng)在大腸桿菌(BJ5183)中完成外源基因插入腺病毒基因組的過程,獲得環(huán)狀的重組腺病毒基因組,并且具有在細(xì)菌中復(fù)制的必需元件。將重組腺病毒基因組酶切線性化后轉(zhuǎn)染HEK293細(xì)胞,避免了雙質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染得到重組腺病毒。

使用這個系統(tǒng)需要注意以下問題:

1.要用能表達(dá)Cre重組酶的特定的大腸桿菌,建議建立菌種庫以免細(xì)菌發(fā)生變化;

2.由于重組是在細(xì)菌中發(fā)生的,微小的基因組變化不易發(fā)現(xiàn);

3.要獲得高品質(zhì)的重組腺病毒毒種(高病毒產(chǎn)量、高目的基因表達(dá))應(yīng)挑選多個重組腺病毒質(zhì)粒,分別轉(zhuǎn)染HEK293細(xì)胞,獲得多個重組病毒來篩選。

可根據(jù)不同的研究需求構(gòu)建腺病毒穿梭載體,如用于RNAi的腺病毒載體、用于基因過表達(dá)的腺病毒載體、用于啟動子活性研究的腺病毒載體等

 

AdMAX系統(tǒng):

AdMax包裝系統(tǒng)是通過Cre/loxP 獲得重組病毒,這個過程發(fā)生在HEK293細(xì)胞中,從而避免在細(xì)菌中重組。將克隆了外源基因的腺病毒穿梭質(zhì)粒與攜帶了腺病毒大部分基因組的包裝質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染HEK293細(xì)胞,利用Cre/loxP系統(tǒng)的作用實(shí)現(xiàn)重組,產(chǎn)生重組腺病毒。這個系統(tǒng)有多種優(yōu)勢,包括操作簡便、重組效率高、獲得的病毒產(chǎn)率高、目的基因的表達(dá)水平高(因?yàn)閙CMV啟動子比hCMV啟動子強(qiáng)若干倍)等。

可根據(jù)不同的研究需求構(gòu)建腺病毒穿梭載體,如用于RNAi的腺病毒載體、用于基因過表達(dá)的腺病毒載體、用于啟動子活性研究的腺病毒載體等

 

技術(shù)流程:

1.獲得目的基因序列;

2.構(gòu)建病毒表達(dá)載體質(zhì)粒;

3.表達(dá)載體質(zhì)粒和包裝質(zhì)粒重組;

4.感染HEK293,包裝出病毒;

5.病毒擴(kuò)增、濃縮;

6.滴度測定。
 

服務(wù)說明:

1.客戶提供目的基因的序列,如果提供模板,請告知載體、酶切穩(wěn)點(diǎn)等信息;

2.默認(rèn)使用AdEasy系統(tǒng),有明確要求請告知;

3.序列過長可能影響病毒滴度;

4.目的蛋白的功能驗(yàn)證另外收費(fèi)。

提交的產(chǎn)品和資料:

1.實(shí)驗(yàn)報告;

2.提供至少1ml滴度>10^10PFU/ml的病毒,特殊基因除外;

訂購方法:
1、詢價及訂購請?zhí)顚?quot;詢價單",并發(fā)送郵件至sales@cobioer.com
2、根據(jù)客戶信息,我們會上門取樣品
3、如需幫助,請發(fā)送郵件至tech@cobioer.com或撥打025-86880024,科佰生物的技術(shù)支持將竭誠為您服務(wù)。
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