穩(wěn)定細(xì)胞株構(gòu)建

穩(wěn)定細(xì)胞株構(gòu)建服務(wù)： 
構(gòu)建穩(wěn)定細(xì)胞系的基本原理是將外源DNA克隆到具有某種抗性的載體上，載體被轉(zhuǎn)染到宿主細(xì)胞并整合到宿主染色體中，用載體中所含的抗性標(biāo)志進(jìn)行篩選。最常用的真核表達(dá)載體的抗性篩選標(biāo)志物有新霉素（neomycin）、潮霉素（hygromycin）和嘌呤霉素(puromycin)，常用G418來代替新霉素進(jìn)行選擇性篩選，篩選得到可穩(wěn)定表達(dá)目的蛋白，或者穩(wěn)定表達(dá)沉默特定基因的細(xì)胞株。

穩(wěn)定細(xì)胞株的構(gòu)建周期長、難度大，每一步都很關(guān)鍵，尤其是細(xì)胞轉(zhuǎn)染，常用物理方法（電轉(zhuǎn)）、化學(xué)方法（脂質(zhì)體等）、生物方法（病毒），根據(jù)不同的實(shí)驗(yàn)條件，選擇最好的方法，來達(dá)到實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹?/p>

科佰生物在穩(wěn)定細(xì)胞株構(gòu)建上擁有豐富的經(jīng)驗(yàn)，熟悉每一步操作，尤其對關(guān)鍵步驟有獨(dú)到的經(jīng)驗(yàn)，成功為眾多科研客戶構(gòu)建目的細(xì)胞株（過表達(dá)、可誘導(dǎo)過表達(dá)、沉默、可誘導(dǎo)沉默、報(bào)告基因等等）。
 

蛋白過表達(dá)穩(wěn)定細(xì)胞株：

目的蛋白的過表達(dá)往往是研究該基因/蛋白功能的常規(guī)手段，也是借助表達(dá)系統(tǒng)富集蛋白（DHFR、GS system）的方法。蛋白過表達(dá)穩(wěn)定細(xì)胞株的構(gòu)建能很好的幫助研究這個(gè)蛋白，或者得到大量的目的蛋白。

科佰生物提供的蛋白過表達(dá)穩(wěn)定細(xì)胞株構(gòu)建服務(wù)借助于真核表達(dá)載體/慢病毒系統(tǒng)，構(gòu)建含有目的基因CDS的質(zhì)粒/病毒，通過轉(zhuǎn)染/感染在各種細(xì)胞基因組上整合目的基因，利用抗生素篩選，得到穩(wěn)定表達(dá)的高拷貝克隆，經(jīng)過32代的穩(wěn)定性QC檢測，完成穩(wěn)定細(xì)胞株的構(gòu)建工作。

主要包含如下步驟:

1. 載體構(gòu)建（表達(dá)質(zhì)粒載體、病毒載體）；

2. 轉(zhuǎn)染/感染；

3. 目的蛋白初步檢測；

4. 抗生素篩選；

5. 目的蛋白再次檢測（定性/半定量）；

6. 單克隆細(xì)胞株穩(wěn)定性檢測。

特殊的過表達(dá)蛋白/細(xì)胞，請事先咨詢。

基因沉默穩(wěn)定細(xì)胞株：

目的蛋白的沉默（knock-down or knock-out）往往是研究該基因/蛋白功能的常規(guī)手段,蛋白沉默后細(xì)胞表型的檢測是科研的金標(biāo)準(zhǔn)方法。

科佰生物提供的蛋白沉默穩(wěn)定細(xì)胞株構(gòu)建服務(wù)借助于真核表達(dá)載體/慢病毒系統(tǒng)，構(gòu)建含有沉默目的基因（shRNA/microRNA）的質(zhì)粒/病毒，通過轉(zhuǎn)染/感染在各種細(xì)胞基因組上整合沉默基因，利用抗生素篩選，得到高效沉默的克隆，經(jīng)過32代的穩(wěn)定性QC檢測，完成穩(wěn)定細(xì)胞株的構(gòu)建工作。

主要包含如下步驟:

1. 載體構(gòu)建（沉默質(zhì)粒載體、病毒載體）；

2. 轉(zhuǎn)染/感染；

3. 目的蛋白初步檢測；

4. 抗生素篩選；

5. 目的蛋白再次檢測（定性/半定量）；

6. 單克隆細(xì)胞株穩(wěn)定性檢測。

特殊的過表達(dá)蛋白/細(xì)胞，請事先咨詢。

蛋白表達(dá)誘導(dǎo)系統(tǒng)：

外源蛋白的誘導(dǎo)表達(dá)/沉默能很好比較本底和干預(yù)的區(qū)別，非常有力的詮釋目的基因/蛋白的作用機(jī)理，特別適合研究自身具有毒性的蛋白，現(xiàn)已經(jīng)被廣泛使用。

科佰生物提供可誘導(dǎo)蛋白表達(dá)/沉默穩(wěn)定細(xì)胞株構(gòu)建服務(wù)借助于真核表達(dá)載體/慢病毒系統(tǒng)，構(gòu)建含有“開關(guān)”控制表達(dá)/沉默目的基因的質(zhì)粒/病毒，通過轉(zhuǎn)染/感染在各種細(xì)胞基因組上整合載體，利用抗生素篩選，得到可誘導(dǎo)的穩(wěn)定細(xì)胞株，經(jīng)過32代的穩(wěn)定性QC檢測，完成穩(wěn)定細(xì)胞株的構(gòu)建工作。

主要包含如下步驟:

1. 載體構(gòu)建（誘導(dǎo)質(zhì)粒載體、病毒載體）；

2. 轉(zhuǎn)染/感染；

3. “開關(guān)”誘導(dǎo)下目的蛋白初步檢測；

4. 抗生素篩選；

5. “開關(guān)”目的蛋白再次檢測（定性/半定量）；

6. 單克隆細(xì)胞株穩(wěn)定性檢測。

特殊的過表達(dá)蛋白/細(xì)胞，請事先咨詢。