凍存保種

 隨著轉(zhuǎn)基因、基因敲除、基因敲入、人源化和其他基因修飾動物的大量制作和使用，保存這些重要的動物模型需要大量的人力、財力和空間投入。　　冷凍保存技術(shù)的出現(xiàn)，為科學(xué)研究者提供了不必花費昂貴代價維持動物模型核心種群的方法。冷凍保存技術(shù)還有其他許多優(yōu)點，如可以避免珍貴的動物模型受到微生物污染；避免受到火災(zāi)、洪水和地震等自然災(zāi)害毀滅性的打擊；更重要的是對于某些品系，可以防止伴隨動物代數(shù)增加出現(xiàn)的基因停止或改變表達的風(fēng)險。與活動物的國際運輸相比，運輸凍存的精子、胚胎或卵巢的成本和風(fēng)險更低。
　　目前，配子凍存以精子和胚胎為主，部分凍存卵巢或卵子，因為卵子解凍后復(fù)蘇效率還比較低。維通達通過凍存精子，胚胎或卵巢組織，可以確保客戶種質(zhì)資源的安全。一旦客戶需要使用凍存的種質(zhì)資源，最快可以4~6周獲得冷凍保存的動物資源。
服務(wù)內(nèi)容和流程：
（1）精子凍存
　　精子凍存在保種服務(wù)中廣泛應(yīng)用，其優(yōu)勢在于技術(shù)成熟，成本低，容易操作等特點。通過無菌手術(shù)分離可育雄鼠的附睪，在特定的溶液進行精子的游離，采集邊緣活力最好的精子，并加入專用的冷凍保護液，通過麥管冷凍保存在液氮中。
建議每個品系提供至少3只12周至4月齡的可育成年小鼠或大鼠，凍存20支麥管的精液。
（2）胚胎凍存
　　胚胎凍存是最早的和最安全的保存實驗動物品系的方法。影響胚胎冷凍保存成功的三個重要方面包括：
　�、倥咛サ臄�(shù)量；
　�、趶�(fù)蘇后存活胚胎的數(shù)量；
③胚胎移植后存活的成年動物數(shù)量。
　　 建議每個品系凍存約300枚2cell胚胎，每管20~30枚胚胎，放入液氮中保存。胚胎的來源，既可以通過超數(shù)排卵的方法，或者通過體外受精（IVF）的方法獲得。當(dāng)然，也可以與品系凈化結(jié)合起來，這樣可以節(jié)約胚胎準(zhǔn)備的成本。
該技術(shù)的流程包括：
　　①胚胎采集。建議凍存2-cell胚胎。
　�、谂咛デ逑�。我們采用國際胚胎移植協(xié)會的建議方案進行清洗，目的是防止胚胎被微生物污染。
　　③胚胎凍存。采用玻璃化冷凍進行，經(jīng)凍存液按照標(biāo)準(zhǔn)的程序處理后，投入液氮保存。
　　④復(fù)蘇驗證。凍存一周后，取出1支驗證管的胚胎進行復(fù)蘇，囊胚發(fā)育率大于50%，或胚胎移植后有小鼠出生，表明胚胎冷凍保存成功。
　　⑤長期保存。驗證保存成功的品系，放入專用的胚胎保存液氮罐中長期保存。