Far-Western Blot分析服務(wù)

Far-Western Blot是一種基于Western Blot技術(shù)的分子生物學(xué)方法，可用于檢測(cè)體外蛋白質(zhì)與蛋白質(zhì)的相互作用，尤其是不需要目標(biāo)蛋白質(zhì)的天然結(jié)構(gòu)的相互作用檢測(cè)。

Far-Western Blot技術(shù)的整體工作流程與Western Blot相似，只是Western Blot中探測(cè)目標(biāo)蛋白質(zhì)需要抗體，而Far-Western Blot分析中不需要抗體，而是使用經(jīng)過(guò)純化和標(biāo)記的“誘餌”蛋白來(lái)探測(cè)和檢測(cè)膜上的目標(biāo)蛋白。在Western Blot和Far-Western Blot中，蛋白質(zhì)都是通過(guò)SDS凝膠和native PAGE凝膠對(duì)樣品進(jìn)行分離，然后將蛋白質(zhì)從凝膠轉(zhuǎn)移到膜上。轉(zhuǎn)模后，用BSA進(jìn)行封閉。在膜上對(duì)蛋白質(zhì)進(jìn)行變性和復(fù)性，及后續(xù)的檢測(cè)步驟。Far-Western Blot技術(shù)用商業(yè)化的高度純化的誘餌蛋白將膜標(biāo)記上探針。在誘餌蛋白與目標(biāo)蛋白反應(yīng)后，根據(jù)所使用的誘餌蛋白，可以檢測(cè)到與該目標(biāo)蛋白相對(duì)應(yīng)的條帶。

為了鑒定與給定蛋白相互作用的蛋白，F(xiàn)ar-Western Blot是一個(gè)實(shí)驗(yàn)成本低、靈敏度高的有效平臺(tái)。遠(yuǎn)western blotting的原理是對(duì)western blotting的改進(jìn)，以自然折疊的重組蛋白作為第一個(gè)探針，與轉(zhuǎn)染到PVDF膜上的蛋白相互作用。Far-Western Blot使用的第二個(gè)探針是針對(duì)給定蛋白的特異性抗體，而酶標(biāo)的第三個(gè)探針是針對(duì)第二個(gè)探針的抗體。當(dāng)與LC-MS-MS蛋白鑒定相結(jié)合時(shí)，可以對(duì)得到的蛋白斑點(diǎn)(或蛋白條帶)進(jìn)行表征，然后進(jìn)行進(jìn)一步的功能分析，如蛋白免疫沉淀等。

Far-Western Blot分析時(shí)，當(dāng)需要保留蛋白質(zhì)的天然構(gòu)象和天然相互作用時(shí)需要注意以下問(wèn)題：1）變性條件下在SDS凝膠中分離的蛋白質(zhì)可能會(huì)發(fā)生變性，而變性蛋白可能不會(huì)與誘餌蛋白發(fā)生反應(yīng)，從而導(dǎo)致無(wú)法識(shí)別出相互作用。2）在結(jié)合之前將蛋白質(zhì)變性并復(fù)性，也可能導(dǎo)致蛋白質(zhì)發(fā)生構(gòu)象變化，從而影響靶蛋白與誘餌蛋白的結(jié)合。3）如果結(jié)合位點(diǎn)受其它因素影響，失去與誘餌蛋白的結(jié)合能力，使誘餌蛋白無(wú)法與之反應(yīng)，也可能導(dǎo)致相互作用檢測(cè)失敗。更棘手的是，以非天然構(gòu)象呈現(xiàn)的蛋白質(zhì)可能以新的非天然方式發(fā)生相互作用，導(dǎo)致檢測(cè)假陽(yáng)性。

百泰派克生物科技提供Far-Western Blot分析服務(wù)，可以根據(jù)您的需求定制實(shí)驗(yàn)，并對(duì)可能影響結(jié)果的潛在因素進(jìn)行評(píng)估。我們承諾給出的數(shù)據(jù)可靠，且可重復(fù)性高。

Far-Western Blot分析

• 可用于體外蛋白質(zhì)相互作用研究
• 分析蛋白的結(jié)合域
• 比較蛋白質(zhì)結(jié)合的親和力
• 無(wú)需特異性抗體

1. 定量蛋白質(zhì)，并通過(guò)SDS或native PAGE分離
2. 將蛋白質(zhì)從凝膠轉(zhuǎn)移到膜上
3. 將蛋白質(zhì)進(jìn)行變性和復(fù)性，以保證膜上的蛋白質(zhì)結(jié)合位點(diǎn)充分暴露
4. BSA緩沖液對(duì)膜進(jìn)行封閉
5. 將膜與純化的誘餌蛋白進(jìn)行孵育
6. 檢測(cè)誘餌蛋白信號(hào)
7. 圖像分析及報(bào)告交付