賽業(yè)課堂：各種類(lèi)型的基因編輯鼠如何建系

《鼠年說(shuō)鼠》系列文章，每周二更新，專(zhuān)門(mén)解答大小鼠鏟屎官們?cè)陴B(yǎng)鼠過(guò)程中經(jīng)常遇到的繁育與鑒定類(lèi)的問(wèn)題，同時(shí)向大家征集問(wèn)題，任何基因編輯鼠飼養(yǎng)繁殖或鑒定的困惑統(tǒng)統(tǒng)可以丟給小賽，小賽會(huì)給您回復(fù)或統(tǒng)一在后面的內(nèi)容為大家做出詳細(xì)的解答。今天我們就開(kāi)始第九期的內(nèi)容吧～

1. 轉(zhuǎn)基因

轉(zhuǎn)基因項(xiàng)目具有插入位點(diǎn)及拷貝數(shù)不確定的特點(diǎn)，獲得的F0代鼠可能各不相同，F(xiàn)0代不能相互交配。需要將F0與野生型多傳幾代，待基因型穩(wěn)定后通過(guò)其他實(shí)驗(yàn)手段篩選出優(yōu)先傳代的品系繼續(xù)繁殖。

2. CRISPR/Cas9技術(shù)構(gòu)建的完全性基因敲除、基因敲入（點(diǎn)突變）鼠

CRISPR/Cas9技術(shù)構(gòu)建的F0代陽(yáng)性鼠由于切割效率和非同源修復(fù)可能會(huì)出現(xiàn)不同的line，需要與野生型鼠交配獲得穩(wěn)定基因型的F1代陽(yáng)性鼠。不同line的后代同樣不建議相互交配。

F0代與野生鼠互配獲得F1代雜合子，F(xiàn)1代雜合子（flox/+）互配得到F2代純合子（flox/flox），F(xiàn)2代純合子（flox/flox）與全身/組織特異性工具鼠交配獲得F3代（flox/+, Cre），F(xiàn)3代（flox/+, Cre）互配得到F4代（flox/flox, Cre），即cKO/cKI純合子。

條件性的項(xiàng)目需要與全身/組織特異性工具鼠交配達(dá)到目的，所以在繁殖過(guò)程中可根據(jù)全身/組織特異性工具鼠自身的特點(diǎn)安排繁殖。

備注：

1. 如果是通過(guò)打靶構(gòu)建的全身/組織特異性工具鼠，要注意選擇與目的基因不在同一條染色體上，以免繁殖不到cKO/cKI純合子。

2. 有生殖細(xì)胞泄露風(fēng)險(xiǎn)的Cre工具鼠，繁殖時(shí)按照建議性別選擇不同基因型鼠。

3. 誘導(dǎo)型的Cre工具鼠，需要加藥后才能實(shí)現(xiàn)特異組織刪除。

4. F1代若有剩余的flox雜合鼠（flox/+），或想要加快獲得目標(biāo)鼠，第2步可以用flox/+直接配Cre工具鼠，可縮短一代周期。

即使是組織特異性工具鼠，也可能在其他組織有泄露表達(dá)的風(fēng)險(xiǎn)。

1. 大小鼠的繁殖生理

2. 如何判斷大小鼠性別及是否懷孕？

3. 如何護(hù)理妊娠期與哺乳期的大小鼠？

4. 大小鼠的繁育應(yīng)注意哪些問(wèn)題以實(shí)現(xiàn)優(yōu)生優(yōu)育？

5. 大小鼠不孕或者后代出生狀況差怎么辦？

6. 小鼠吃仔怎么辦？

7. 如何避免小鼠打架？

8. 小鼠脫毛了怎么辦？

如何提取組織DNA模板？