分子生物學(xué)：熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)

 熒光定量PCR起源：熒光定量PCR（也稱TaqMan PCR,以下簡稱FQ-PCR）是美國PE（Perkin Elmer）公司1995年研制出來的一種新的核酸定量技術(shù)，該技術(shù)是在常規(guī)PCR基礎(chǔ)上加入熒光標(biāo)記探針來實(shí)現(xiàn)其定量功能的，與變通PCR相比，F(xiàn)Q-PCR具有許多優(yōu)點(diǎn)。與普通PCR相比，F(xiàn)Q-PCR具有許多優(yōu)點(diǎn)：1、封閉反應(yīng)，無需PCR后處理。2、特異性強(qiáng)，靈敏度高。3、采用對(duì)數(shù)期分析，摒棄終點(diǎn)數(shù)據(jù)，定量準(zhǔn)確。4、定量范圍寬，可達(dá)到10個(gè)數(shù)量級(jí)。5、儀器在線式實(shí)時(shí)檢測，結(jié)果直觀，避免人為判斷。6、可實(shí)現(xiàn)一管雙檢或多檢。7、操作安全，縮短時(shí)間，提高效率。熒光定量 PCR是 通過對(duì) PCR 擴(kuò)增反應(yīng)中每一個(gè)循環(huán)產(chǎn)物熒光信號(hào)的實(shí)時(shí)檢測從而實(shí)現(xiàn)對(duì)起始模板定量及定性的分析。

熒光定量PCR分類：
一、TaqMan熒光探針
PCR擴(kuò)增時(shí)在加入一對(duì)引物的同時(shí)加入一個(gè)特異性的熒光探針，該探針為一寡核苷酸，兩端分別標(biāo)記一個(gè)報(bào)告熒光基團(tuán)和一個(gè)淬滅熒光基團(tuán)。探針完整時(shí)，報(bào)告基團(tuán)發(fā)射的熒光信號(hào)被淬滅基團(tuán)吸收；PCR擴(kuò)增時(shí)，Taq酶的5‘-3‘外切酶活性將探針酶切降解，使報(bào)告熒光基團(tuán)和淬滅熒光基團(tuán)分離，從而熒光監(jiān)測系統(tǒng)可接收到熒光信號(hào)，即每擴(kuò)增一條DNA鏈，就有一個(gè)熒光分子形成，實(shí)現(xiàn)了熒光信號(hào)的累積與PCR產(chǎn)物形成完全同步。
二、SYBR Green熒光染料
SYBR Green是一種DNA結(jié)合染料，能非特異地?fù)饺氲诫p鏈DNA中去。在游離狀態(tài)下，它不發(fā)出熒光，但一旦結(jié)合到雙鏈DNA中以后，便可以發(fā)出熒光。它的最大優(yōu)點(diǎn)就是可以與任意引物、模板相配合，用于任意反應(yīng)體系中。從經(jīng)濟(jì)角度考慮，它也比其它的探針的價(jià)格要便宜得多。但由于它能與所有的雙鏈DNA結(jié)合，所以一旦反應(yīng)體系中出現(xiàn)非特異擴(kuò)增，那它就會(huì)影響到定量結(jié)果的可靠性與重復(fù)性。要避免這種不利因素，可以通過選擇良好的引物并優(yōu)化反應(yīng)條件以消除非特異性影響。

RT-qPCR主要實(shí)驗(yàn)步驟，是由三個(gè)步驟組成:
1.反轉(zhuǎn)錄:依賴反轉(zhuǎn)錄酶將RNA反轉(zhuǎn)錄成cDNDA;
2.擴(kuò)增:用PCR的方法擴(kuò)增cDNA;
3.檢測:實(shí)時(shí)檢測和定量擴(kuò)增的產(chǎn)物.

熒光定量PCR中的一些術(shù)語：
1. CT值：熒光信號(hào)有統(tǒng)計(jì)意義顯著增長(即穿過閾值線)時(shí)的循環(huán)次數(shù)，或者說是從基線到指數(shù)增長的拐點(diǎn)所對(duì)應(yīng)的循環(huán)次數(shù)。
2. 閾值：閾值的默認(rèn)設(shè)置是3-15個(gè)循環(huán)的熒光信號(hào)的標(biāo)準(zhǔn)偏差的10倍。
3. CT值與起始模板的量成線性關(guān)系。

客戶需知：
1、請(qǐng)您提供新鮮的且盡量多的材料，或直接提供純化好的總RNA或DNA（大于5ug/樣本）。如是如織：100-200mg
2、請(qǐng)通過EMAIL提供已知的全長基因序列。Email:huameixinan@163.com
3、請(qǐng)?zhí)峁┰敿?xì)背景資料：DNA/RNA來源，豐度。

結(jié)果提供：
1、實(shí)驗(yàn)詳細(xì)步驟，和相關(guān)數(shù)據(jù)。
2、標(biāo)準(zhǔn)曲線，擴(kuò)增曲線，溶解曲線。
3、完整的實(shí)驗(yàn)報(bào)告（含軟件分析結(jié)果）

最近優(yōu)惠：
1、引物合成，費(fèi)用全免。
2、免費(fèi)提供3次重復(fù)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
3、引物和探針設(shè)計(jì)免費(fèi)。
4、RNA抽提費(fèi)用全免。
5、免費(fèi)提供RNA保護(hù)試劑，上門服務(wù)取樣。

實(shí)驗(yàn)具體收費(fèi)、標(biāo)本的收集、實(shí)驗(yàn)完成時(shí)間、實(shí)驗(yàn)試劑的定購等事宜，請(qǐng)聯(lián)系嘉美生物。
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