隨著轉(zhuǎn)基因、基因敲除、基因?qū)、人源化和其他基因修飾?dòng)物的大量制作和使用,保存這些重要的動(dòng)物模型需要大量的人力、財(cái)力和空間投入。
冷凍保存技術(shù)的出現(xiàn),為科學(xué)研究者提供了不必花費(fèi)昂貴代價(jià)維持動(dòng)物模型核心種群的方法。冷凍保存技術(shù)還有其他許多優(yōu)點(diǎn),如可以避免珍貴的動(dòng)物模型受到微生物污染;避免受到火災(zāi)、洪水和地震等自然災(zāi)害毀滅性的打擊;更重要的是對(duì)于某些品系,可以防止伴隨動(dòng)物代數(shù)增加出現(xiàn)的基因停止或改變表達(dá)的風(fēng)險(xiǎn)。與活動(dòng)物的國(guó)際運(yùn)輸相比,運(yùn)輸凍存的精子、胚胎或卵巢的成本和風(fēng)險(xiǎn)更低。
目前,配子凍存以精子和胚胎為主,部分凍存卵巢,較少凍存卵子,因?yàn)槟壳奥炎咏鈨龊髲?fù)蘇效率還比較低。維通達(dá)通過(guò)凍存精子,胚胎或卵巢組織,可以確?蛻舴N質(zhì)資源的安全。一旦客戶需要使用凍存的種質(zhì)資源,最快可以4~6周獲得冷凍保存的動(dòng)物資源。
服務(wù)內(nèi)容和流程:
(1)精子凍存
精子凍存在保種服務(wù)中廣泛應(yīng)用,其優(yōu)勢(shì)在于技術(shù)成熟,成本低,容易操作等特點(diǎn)。通過(guò)無(wú)菌手術(shù)分離可育雄鼠的附睪,在特定的溶液進(jìn)行精子的游離,采集邊緣活力最好的精子,并加入專用的冷凍保護(hù)液,通過(guò)麥管冷凍保存在液氮中。
建議客戶每個(gè)品系提供2~3只12周至4月齡的可育成年小鼠或大鼠,凍存10支麥管的精液。
(2)胚胎凍存
胚胎凍存是最早的和最安全的保存實(shí)驗(yàn)動(dòng)物品系的方法。影響胚胎冷凍保存成功的三個(gè)重要方面包括:
①胚胎的數(shù)量;
②復(fù)蘇后存活胚胎的數(shù)量;
、叟咛ヒ浦埠蟠婊畹某赡陝(dòng)物數(shù)量。
維通達(dá)建議客戶每個(gè)品系凍存約200~300枚2cell胚胎,即8管胚胎放入液氮中保存,每管30枚胚胎。胚胎的來(lái)源,既可以通過(guò)超數(shù)排卵的方法,或者通過(guò)體外受精(IVF)的方法獲得。當(dāng)然,也可以與品系凈化結(jié)合起來(lái),這樣可以節(jié)約獲得足量數(shù)目胚胎的準(zhǔn)備成本。
該技術(shù)的流程包括:
①胚胎采集。Vitalstar建議凍存2-cell胚胎。
②胚胎清洗。我們采用國(guó)際胚胎移植協(xié)會(huì)的建議方案進(jìn)行清洗,目的是防止胚胎被微生物感染。
、叟咛龃。采用玻璃化冷凍進(jìn)行,經(jīng)凍存液按照標(biāo)準(zhǔn)的程序處理后,投入液氮保存。
、軓(fù)蘇驗(yàn)證。凍存一周后,我們?nèi)〕?支驗(yàn)證管的胚胎進(jìn)行復(fù)蘇,胚胎移植后檢驗(yàn)出生小鼠的存活情況,若存活率大于50%,表明胚胎冷凍保存成功。
⑤長(zhǎng)期保存。驗(yàn)證保存成功的品系,我們會(huì)放入專用的胚胎保存液氮罐中長(zhǎng)期保存。
(3)其他類型配子的凍存
維通達(dá)也可以提供卵巢組織切片和卵母細(xì)胞的凍存服務(wù)。由于這些技術(shù)還處于研發(fā)階段,建議客戶無(wú)法采用精子冷凍和胚胎冷凍保存時(shí)嘗試使用。
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北京維通達(dá)生物技術(shù)有限公司是在國(guó)家863計(jì)劃倡導(dǎo)下,為推動(dòng)我國(guó)疾病模型動(dòng)物的研發(fā)和產(chǎn)業(yè)化,于2000年成立的一家專業(yè)從事遺傳修飾動(dòng)物模型研究與開(kāi)發(fā)并提供相關(guān)產(chǎn)品和技術(shù)服務(wù)的高科技公司。
維通達(dá)有一支海歸博士和國(guó)內(nèi)知名大學(xué)博士領(lǐng)軍的技術(shù)人才隊(duì)伍,在模型動(dòng)物研發(fā)領(lǐng)域擁有十多年的深厚的技術(shù)積淀和研發(fā)及實(shí)驗(yàn)操作經(jīng)驗(yàn),成功建立了成熟的高效大規(guī)模制備疾病動(dòng)物模型的技術(shù)平臺(tái),將轉(zhuǎn)基因,基因敲除/敲入技術(shù)建成了系統(tǒng)化、流程化的操作模式;具備從基因克隆、載體構(gòu)建到顯微注射、品系建立、基因型鑒定、表型分析檢測(cè)、冷凍保存等一系列相關(guān)的技術(shù)服務(wù)能力。與此同時(shí),公司還掌握了慢病毒轉(zhuǎn)基因,噬菌體介導(dǎo)的同源重組,基因誘捕,條件性基因敲除,四倍體胚胎聚合,小鼠克隆及iPS細(xì)胞誘導(dǎo)分化等領(lǐng)域內(nèi)相關(guān)的前沿技術(shù),大大提高了疾病模型研發(fā)服務(wù)的能力和水平。維通達(dá)利用該平臺(tái)技術(shù)已經(jīng)為國(guó)內(nèi)外客戶成功制作幾十種遺傳修飾小鼠和數(shù)百種嵌合體小鼠。
維通達(dá)利用該平臺(tái)服務(wù)客戶的同時(shí),還致力于開(kāi)發(fā)與人類重大疾病研究相關(guān)的理想的小動(dòng)物模型,已經(jīng)成功研制出了人源化造血/免疫系統(tǒng)小鼠模型和人源化肝臟小鼠模型,其中人源化肝臟小鼠模型中肝臟人源化程度可達(dá)80%以上。目前我們可以提供兩種人源化小鼠的制作服務(wù),期望幫助客戶解決艾滋病病毒(HIV),乙型肝炎病毒(HBV),丙型肝炎病毒(HCV)和瘧疾(Malaria)等人類疾病研究缺乏動(dòng)物感染模型的難題,為相關(guān)新藥研發(fā)提供可靠的體內(nèi)研究平臺(tái)。
硬件設(shè)施方面,維通達(dá)公司擁有分子生物學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、細(xì)胞培養(yǎng)、顯微注射等專業(yè)實(shí)驗(yàn)室和SPF級(jí)動(dòng)物房,可以提供從基因打靶,胚胎操作,品系建立等一系列遺傳修飾小鼠制作相關(guān)的技術(shù)服務(wù),同時(shí)也提供自有的人源化模型和各類原代/iPS細(xì)胞產(chǎn)品等。維通達(dá)的目標(biāo)是成長(zhǎng)為國(guó)內(nèi)外客戶提供動(dòng)物模型相關(guān)完整解決方案的專業(yè)化領(lǐng)軍企業(yè),我們期望以專業(yè)化,個(gè)性化,精準(zhǔn)的服務(wù)為推動(dòng)生命科學(xué)研究,促進(jìn)人類健康貢獻(xiàn)一份力量!