引物合成/快速交付/質(zhì)量可靠/純化方式可選/引物標(biāo)記

引物合成

【服務(wù)介紹】
引物合成采用固相亞磷酰胺三酯法。亞磷酰胺三酯法合成DNA片段，具有高效、快速的偶聯(lián)以及起始反應(yīng)物比較穩(wěn)定的特點(diǎn)。亞磷酰胺三酯法是將DNA固定在固相載體上完成DNA鏈的合成的，合成的方向是由待合成引物的3′端向5′端合成的，相鄰的核苷酸通過3′→5′磷酸二酯鍵連接。

【服務(wù)特色】

• 實(shí)驗(yàn)基地：全國多個(gè)城市都有實(shí)驗(yàn)基地，近距離的提供服務(wù)。
• 快速交付：常規(guī)引物當(dāng)日下單，次日送達(dá)（僅滿足有實(shí)驗(yàn)基地的城市）。
• 質(zhì)量可靠：嚴(yán)格的質(zhì)控，所有修飾引物全部采用HPLC純化。
• 純化方式可選：可提供OPC(脫鹽)、PAGE、HPLC純化，滿足各種實(shí)驗(yàn)需求。
• 引物標(biāo)記：提供各種化學(xué)修飾堿基、生物素、熒光標(biāo)記等（詳見修飾引物）。

（一）普通引物合成
普通引物類別：

常規(guī)引物：6-59 mer

長鏈引物：60-150 mer

純化方式選擇：

純化方式	5～20 mer	21～40 mer	41～60 mer	61～90 mer	91～150 mer	應(yīng)用
OPC純化	適用	推薦	推薦	適用	不適用	PCR擴(kuò)增、亞克隆、點(diǎn)突變、全基因合成及DNA測序等。
PAGE純化	不適用	適用	適用	推薦	推薦	對40 mer以上的普通引物的純化，用于定點(diǎn)突變、克隆、蛋白結(jié)合凝膠遷移電泳分析等。
HPLC純化	推薦	推薦	適用	不適用	不適用	小于50 mer的普通引物的純化，上述應(yīng)用及修飾引物的純化；商業(yè)化的診斷引物或探針等。

收費(fèi)方式：

引物長度	純化方式	合成量	收費(fèi)方式
6-15 mer	OPC(脫鹽)	1-5 OD	20元/條
	PAGE	1-5 OD	20元/條
	HPLC	1-5 OD	20元/條 + 80元純化費(fèi)
16-59 mer	OPC(脫鹽)	1-5 OD	1.2元/mer
	PAGE	1-5 OD	1.5元/mer
	HPLC	1-5 OD	1.2元/mer + 80元純化費(fèi)
60-90 mer	OPC(脫鹽)	1-2 OD	4元/mer
	PAGE	1-2 OD	4元/mer
	HPLC	1-2 OD	4元/mer + 80元純化費(fèi)
90-150 mer	OPC(脫鹽)	1-2 OD	7元/mer
	PAGE	1-2 OD	7元/mer
	HPLC	1-2 OD	7元/mer+80元純化費(fèi)

【服務(wù)說明】

• 未注明合成量，我們將按照總量2 OD，分裝2管合成。
•  兼并堿基按照常規(guī)引物收費(fèi)。
• 引物＜15 mer的按條收費(fèi)，引物＞59 mer的按長鏈?zhǔn)召M(fèi)。
• 修飾引物價(jià)格計(jì)算方式：總價(jià)=常規(guī)引物的價(jià)格+修飾價(jià)格。
• 如需周末送貨，請與當(dāng)?shù)劁N售聯(lián)系。
• 兼并引物對應(yīng)：R=G+A 、Y=C+T 、K=G+T 、W=A+T 、S=C+G 、M=A+C 、B=C+G+T 、D=A+G+T 、H=A+C+T 、 V=A+C+G 、N=A+C+G+T

（二）修飾引物合成
修飾引物類別：

我們可以合成所有常見的修飾引物。我們合成的修飾引物全部采用HPLC純化，確保引物序列準(zhǔn)確性和更好的純度。修飾引物的HPLC純化不收取純化費(fèi)用。

修飾引物的價(jià)格=普通DNA 合成價(jià)格+修飾價(jià)格。

 雙標(biāo)記引物合成： 
【引物常見問題】
Q-1、合成DNA溶液在室溫下放置了數(shù)天，還可以使用嗎?

A-1.溶液中的Oligo DNA常溫下數(shù)天（3-4天）應(yīng)該沒問題，但最好不要放置一個(gè)星期以上。其壽命受溶液中的菌體、核酸酶等的影響。

---

Q-2、怎樣理解測定的OD值?

A-2.進(jìn)行OD值測定時(shí)，分光光度計(jì)上顯示的數(shù)值為每毫升溶液中的OD值。當(dāng)測定200 ml溶液中的OD值為1.5時(shí)，溶液整體的OD量應(yīng)該為多少？此時(shí)的OD值 = 1.5 OD/ml × 0.2 ml = 0.3 OD。

---

Q-3、怎樣對合成的DNA制品進(jìn)行定量?

A-3. DNA的量與260 nm處的吸光度值（OD值）成正比，因此使用紫外分光光度計(jì)定量是最科學(xué)的。1個(gè)OD值的合成DNA的重量約為33 mg。

---

Q-4、合成Oligo DNA應(yīng)怎樣保存?

A-4.保存合成的Oligo應(yīng)該注意以下幾點(diǎn)： 

(1).干燥制品很穩(wěn)定，常溫下數(shù)個(gè)月無問題。但為保證萬無一失，放置于-20℃保存為好。 

(2).溶解后的溶液DNA短期內(nèi)（1-2周）使用可放置在4℃下保存，長期保存請放置于-20℃。溶解DNA時(shí)，請注意使用無菌、無核酸酶的水或TE Buffer。

(3).熒光標(biāo)記引物請避光保存。

---

Q-5、制品溶解后發(fā)現(xiàn)有少許沉淀，會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果嗎?

A-5.所有的制品純化后都要進(jìn)行脫鹽，脫鹽是使用C18柱進(jìn)行的，偶而會(huì)有微量的樹脂溢出而進(jìn)入制品。樹脂不影響任何反應(yīng)結(jié)果，請稍許離心后取上清使用。

---

Q-6、為什么PAGE級(jí)和高純度級(jí)制品的提供量比其他公司少?  

A-6.無論是PAGE純化，還是HPLC純化，增大每次的純化量會(huì)大大降低制品的純度。所以，為了保證制品質(zhì)量，我們一般把每次的純化量控制在2 OD左右。大OD量的提供對提高純度是不現(xiàn)實(shí)，不科學(xué)的做法。一般，1 OD的20mer的DNA制品 (約5 nmol)，可以進(jìn)行200-400 次的PCR反應(yīng) (50ml體系)，以及1,400次的測序反應(yīng)。因此，2 OD 的DNA量可以足夠進(jìn)行一般的實(shí)驗(yàn)工作。

---

Q-7、我公司的DNA制品包裝中為什么不提供電泳照片? 

A-7.進(jìn)行過Oligo DNA PAGE電泳的人員都知道，同一OD量的不同序列的DNA制品電泳時(shí)的泳帶亮度（清晰度）是不一樣的。原因在于EB等染色劑的染色是滲透至DNA的雙鏈之間的，而合成的Oligo DNA是單鏈，Oligo DNA自身形成的立體結(jié)構(gòu)越復(fù)雜，EB的染色就越容易，DNA帶也就越亮。相反，有一些Oligo DNA由于不形成立體結(jié)構(gòu)，根本就不為EB所染色。因此，我們認(rèn)為有些公司對所有產(chǎn)品都提供差不多同一亮度的制品的電泳照片是非常不現(xiàn)實(shí)的做法。

---

Q-8、使用3%的Agarose凝膠電泳合成Oligo DNA制品，發(fā)現(xiàn)有很多條泳帶，為什么?

A-8.Oligo DNA的電泳一定要使用變性PAGE電泳。Oligo DNA是單鏈DNA，容易形成復(fù)雜的立體結(jié)構(gòu)，因此進(jìn)行Agarose電泳時(shí)，容易出現(xiàn)多條泳帶（更無法用Agarose電泳進(jìn)行定量了)。

---

Q-9、進(jìn)行PAGE電泳時(shí)，長度完全一樣的Oligo DNA為什么泳帶不在同一位置?

A-8.Oligo DNA的電泳一定要使用變性PAGE電泳。Oligo DNA是單鏈DNA，容易形成復(fù)雜的立體結(jié)構(gòu)，因此進(jìn)行Agarose電泳時(shí)，容易出現(xiàn)多條泳帶（更無法用Agarose電泳進(jìn)行定量了)。

(1). A、G、C、T的組份不同，電泳速度不同；

(2). DNA的立體結(jié)構(gòu)不同，電泳速度不同。這種情況在Oligo DNA越短時(shí)越容易發(fā)生，長鏈Oligo DNA之間差別較小。

---

Q-10、PCR產(chǎn)物經(jīng)克隆后測序發(fā)現(xiàn)，引物處的堿基有錯(cuò)誤，為什么?

(1). 合成機(jī)管路的瞬時(shí)阻堵，造成化學(xué)反應(yīng)的瞬間中斷，其結(jié)果可能會(huì)發(fā)生單個(gè)(或一部分)堿基的缺失。

(2). 計(jì)算機(jī)程序失靈，控制錯(cuò)誤合成。

(3). 合成過程中，堿基附加至DNA片段之前，堿基和堿基之間發(fā)生了偶聯(lián)，然后再附加到了DNA片段上，造成多堿基現(xiàn)象。

(4). 合成時(shí)堿基G可能會(huì)轉(zhuǎn)化成烯醇異構(gòu)體，此時(shí)進(jìn)行PCR反應(yīng)時(shí)G會(huì)轉(zhuǎn)變成A。

(5). 合成過程中的脫嘌呤作用，對脫嘌呤后的堿基DNA聚合酶不能識(shí)別，此時(shí)可能觀察到A或G的缺失。嘌呤含量越高，就越容易發(fā)生這種情況。

(6). 不完全的脫保護(hù)結(jié)果。通常C脫得快，G脫得慢。不完全脫保護(hù)會(huì)發(fā)生堿基缺失。

(7). 合成過程中的Capping（蓋帽）反應(yīng)不完全，使短片段DNA繼續(xù)參與合成，造成堿基缺失。 應(yīng)該說，上述這些情況發(fā)生的可能性都極低。然而，合成的DNA鏈越長，發(fā)生這種情況的機(jī)率也就越大。

---

Q-11、PCR產(chǎn)物經(jīng)克隆后測序發(fā)現(xiàn)，引物處的堿基有錯(cuò)誤，怎么辦?

A-11.(1). 因?yàn)橐�物純度不可能�?00%，因此，挑選克隆時(shí)，有可能挑選了雜質(zhì)引物擴(kuò)增出的PCR產(chǎn)物的克隆。此時(shí)，請重新挑選一個(gè)克隆測序，也許結(jié)果會(huì)變好。

(2). 如果挑選2 ~ 3個(gè)克隆測序情況還沒改觀，我們會(huì)免費(fèi)重新合成引物。

---

Q-12、進(jìn)行蛋白表達(dá)實(shí)驗(yàn)數(shù)個(gè)月不成功，后經(jīng)測序發(fā)現(xiàn)引物處有錯(cuò)誤，怎么辦? 

A-12.(1). 表達(dá)實(shí)驗(yàn)之前一定要對DNA序列進(jìn)行驗(yàn)證，這是實(shí)驗(yàn)的常識(shí)。

(2). 我們可以免費(fèi)重新合成引物。

(3). 如進(jìn)行索賠時(shí)，按國際行業(yè)慣例，索賠范圍限于制品價(jià)格范圍之內(nèi)。

---

Q-13、怎樣才能保證Oligo DNA的正確性? 

A-13.(1). 合成Oligo DNA時(shí)，選用高純度級(jí)制品。

(2). 避免使用大于50mer的長鏈Oligo DNA，最好選用小于35mer的合成DNA制品。

(3). 進(jìn)行克隆實(shí)驗(yàn)時(shí)，每次克隆都須進(jìn)行測序驗(yàn)證，以保證序列的正確性，然后再進(jìn)行進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)。進(jìn)行蛋白表達(dá)實(shí)驗(yàn)時(shí)，尤其需要注意。

---

Q-14、Oligo DNA最長可以合成多少個(gè)堿基? 

A-14.以每步反應(yīng)效率為99%進(jìn)行計(jì)算，粗略計(jì)算合成到100個(gè)堿基時(shí)，目的DNA片段的比例便為0 (精確數(shù)為37.0%)，要想保證合成DNA的堿基100%正確，Oligo DNA的長度最好不要超過70mer，80mer以上要想保證一個(gè)堿基不錯(cuò)就非常危險(xiǎn)了，須十分注意。

---

Q-15、一般的合成Oligo DNA的5'和3'末端有Q嗎? (Q為修飾) 

A-15.沒有，5'和3'末端均為-OH基。如需要加Q，訂貨時(shí)請?zhí)貏e注明，此時(shí)需收取加Q (Q修飾) 的費(fèi)用。

---

Q-16、合成的引物進(jìn)行PCR反應(yīng)時(shí)無目的帶，怎么辦?

A-16.PCR反應(yīng)失敗的原因很多，可以從以下幾個(gè)方面考慮。

(1). 引物和模板是否配對，同源性有多大?

(2). 引物本身是否有立體結(jié)構(gòu)，或者二條引物之間是否形成高次結(jié)構(gòu)?

(3). PCR反應(yīng)用試劑是否能正常工作?

(4). PCR儀是否工作正常?

(5). PCR反應(yīng)條件是否合適?

【公司簡介】
北京擎科生物科技有限公司（Tsingke Biotechnology Co., Ltd.）是一家為生命科學(xué)領(lǐng)域提供技術(shù)服務(wù)及產(chǎn)品的國家高新技術(shù)企業(yè)。公司深耕于基因合成技術(shù)及其上下游產(chǎn)品的開發(fā)應(yīng)用，業(yè)務(wù)范圍涵蓋生命科學(xué)服務(wù)及產(chǎn)品、工具酶及合成生物學(xué)產(chǎn)品、生物制造CRO/CDMO開發(fā)與生產(chǎn)服務(wù)三大方向。公司肩負(fù)推動(dòng)生物科技發(fā)展、讓世界更美好的使命，秉承品質(zhì)、創(chuàng)新、共贏、奮斗的價(jià)值觀，始終將行業(yè)需求作為公司的導(dǎo)向，為客戶提供基因測序、DNA/RNA合成、分子生物學(xué)試劑、合成儀等儀器設(shè)備、化學(xué)合成原材料以及多種科研項(xiàng)目服務(wù)。

作為基因合成領(lǐng)域的佼佼者，經(jīng)過多年的數(shù)據(jù)和經(jīng)驗(yàn)積累，專注于合成生物學(xué)研發(fā)及應(yīng)用平臺(tái)搭建，形成了完整的基因合成產(chǎn)業(yè)鏈和完善的服務(wù)體系，業(yè)務(wù)覆蓋全國并延伸至美國、德國等多個(gè)海外國家和地區(qū)，累計(jì)為全球約12萬用戶提供服務(wù)與產(chǎn)品。

作為國家高新技術(shù)企業(yè)、北京市知識(shí)產(chǎn)權(quán)試點(diǎn)單位，擎科生物注重自主研發(fā)的同時(shí)，通過多領(lǐng)域?qū)�業(yè)人才的引進(jìn)，不斷發(fā)展和完善核心技術(shù)創(chuàng)新研發(fā)體系。參與多項(xiàng)國家及省部級(jí)科技研發(fā)項(xiàng)目，同時(shí)參與制定了國家及行業(yè)相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)。自公司成立以來，先后與天津大學(xué)、浙江工業(yè)大學(xué)、天津工業(yè)生物技術(shù)研究所等多家高校和科研院所進(jìn)行戰(zhàn)略合作，并與知名院士團(tuán)隊(duì)共建生物技術(shù)聯(lián)合創(chuàng)新中心，進(jìn)行校企合作、培育行業(yè)人才，實(shí)現(xiàn)產(chǎn)學(xué)研一體化，引領(lǐng)合成生物學(xué)的創(chuàng)新發(fā)展。

擎科生物致力于為從事生命科學(xué)研究的科研人員及企事業(yè)單位提供高質(zhì)量、本地化的生物技術(shù)服務(wù)和產(chǎn)品，公司已通過CNAS質(zhì)量體系認(rèn)證，擁有符合生物醫(yī)藥診斷標(biāo)準(zhǔn)的10萬級(jí)潔凈生產(chǎn)車間和自動(dòng)化生產(chǎn)設(shè)備，以及超過12000m2的創(chuàng)新研發(fā)中心。截至2020年11月，擎科生物擁有91項(xiàng)專利及核心技術(shù)，其中40多項(xiàng)發(fā)明專利，使用擎科生物服務(wù)和產(chǎn)品客戶發(fā)表文章累計(jì)超過3100篇，影響因子累計(jì)超過1萬。

北京擎科生物科技有限公司      
地址：北京市經(jīng)濟(jì)開發(fā)區(qū)經(jīng)海四路156號(hào)院5號(hào)樓401